24小时热门版块排行榜    

查看: 2012  |  回复: 5
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fancrystalli

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤中含有农药,提取的土壤DNA进行PCR扩增,农药会抑制PCR反应吗

最近在做土壤微生态研究,目的是研究土壤中添加农药后对土壤中微生物的影响,取样在农药施用一个月内,具体残留还未做。现在用的是MOBIO公司的power DNA提取试剂盒,按照大多数人的说法,这已经是很好的而且用的很广的土壤DNA提取试剂盒了,提取出来的DNA电泳可见,但就是PCR得不到目的条带,阳性对照成功扩增出,采用降落PCR,将样品进行过10~50倍的稀释,仍扩增失败。想请教有经验的前辈,会不会是因为土壤中的农药残留对PCR产生了抑制,如果是的话,应该怎样处理?在此,先谢谢大家了。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabing0324

金虫 (职业作家)

现在扩出来了没呢?祝好运
5楼2011-07-04 11:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助。楼主说的对照可能不是土壤样品吧。 2011-06-15 21:47:40
农药应该不会抑制PCR反应,因为你的阳性对照能P出来

可能还是引物有问题
2楼2011-06-15 19:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): good! 2011-06-15 21:50:56
农药一般不会抑制DNA聚合酶活性,而抑制胆碱酯酶活性的较多,农药大多是神经毒剂,一般导致昆虫过度兴奋而死,反过来说,几乎没有农药设计DNA聚合酶为靶点。而除草剂一般分为激素类、光合抑制类、阻抑氨基酸、脂类合成、抑制细胞分裂等,也不会抑制DNA聚合酶。

再说,你用的试剂盒我也在用,相当好。提纯的DNA不会带有土壤中DNA以外的物质,水除外。
3楼2011-06-15 20:41:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fancrystalli

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-06-15 19:55:00:
农药应该不会抑制PCR反应,因为你的阳性对照能P出来

可能还是引物有问题

阳性对照是纯细菌的染色体DNA,引物用的是16S V3区通用引物,阳性对照已经扩增出来了,引物应该没问题吧
4楼2011-06-16 09:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见