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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR时 DNA模版过多会影响PCR的结果吗？？
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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勇敢小飞侠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:47:35
肯定有影响，一般如果是质粒的话我就50ng，基因组DNA的话就稍微多点    你具体可以看下使用的PCR酶的说明说，上面都会有推荐用量的~
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
11楼2013-05-07 22:49:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:47:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

一般是nanodrop一下，虽然如果样品不是很纯的话有可能不特别准。实在不行的话只有估测。一般确定提DNA的材料用量，提出来的DNA的总量每次都差不多。
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12楼2013-05-07 23:26:01
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珊珊1025

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:47:52
25ul体系中加1ul模板，模板浓度在50ng/ul左右
这个也许会对你有帮助 http://blog.sina.com.cn/s/blog_58a884680100mz4e.html
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努力做一只好虫子
13楼2013-05-08 17:39:57
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:47:58
DNA模板含量过多会有影响的。我们做的是微生物的，模板量在10-100ng，25微升体系
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14楼2013-05-08 18:01:14
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cute_man

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:48:05
有影响，但一般不大，一般25或者50微升的体系加入的模板量30-100ng都不会有问题，模板浓度用分光光度计测定。做到后面就发现，常规pcr其实很粗放的。
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15楼2013-05-08 19:51:03
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lvanmorison

禁虫 (初入文坛)
★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:48:11
本帖内容被屏蔽
16楼2013-05-09 10:54:17
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710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-09 20:48:17
绝对会影响的，我们这边做流调提出来的DNA加太多模板的话图也不好看，一大片亮带，对测序都会影响的，不能拿去测序的
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may
17楼2013-05-09 11:23:36
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hyl860121

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 的确是这样！ 2013-05-09 20:48:32
像菌落PCR，模板浓度太高会P不出来。。。
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18楼2013-05-09 17:00:43
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zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-05-07 17:06:28
怎么确定浓度呢 ?...

用Nanodrop测定啊
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19楼2013-05-09 17:53:44
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by zx1990 at 2013-05-09 17:53:44
用Nanodrop测定啊...

谢了
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一花一世界、一叶一菩提
20楼2013-05-10 13:13:46
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