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至尊木虫 (著名写手)

One Piece

引用回帖:
10楼: Originally posted by dongjingjia at 2013-10-28 22:26:43
就是做基因克隆
...

那你的目的基因多大?后面的如果有目的条带,直接切胶回收是可以的
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
11楼2013-10-29 08:30:01
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Autumngrain

新虫 (初入文坛)

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★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-30 12:47:56
一,提高退火温度(建议用PCR仪做一个温度梯度。)
二,换primer,目测非特异性条带比较多(去NCBI Primer-BLAST检测引物特异性)。
三,请说明具体电泳时间, marker大小,凝胶浓度,以及primer浓度。
12楼2013-10-29 12:31:26
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dingzhuang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-30 12:48:04
你的marker是多少?2000的吗?目的片段大概是多少?感觉延伸2min太长了。
条带好像出来了嘛。用少量(20u体系)用梯度设置摸一摸合适的退火温度。一直有非特异条带就切胶回收。
酶是说有0.5u,浓度是多少啊?50的体系一般酶需要1.5-2U吧。
实验!成果!文章!毕业!工作!
13楼2013-10-30 10:08:48
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