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至尊木虫 (著名写手)

One Piece

引用回帖:

10楼: Originally posted by dongjingjia at 2013-10-28 22:26:43
就是做基因克隆
...

那你的目的基因多大?后面的如果有目的条带，直接切胶回收是可以的

有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！

11楼2013-10-29 08:30:01

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新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 12:47:56

一，提高退火温度（建议用PCR仪做一个温度梯度。）
二，换primer，目测非特异性条带比较多（去NCBI Primer-BLAST检测引物特异性）。
三，请说明具体电泳时间， marker大小，凝胶浓度，以及primer浓度。

12楼2013-10-29 12:31:26

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铜虫 (初入文坛)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 12:48:04

你的marker是多少？2000的吗？目的片段大概是多少？感觉延伸2min太长了。
条带好像出来了嘛。用少量（20u体系）用梯度设置摸一摸合适的退火温度。一直有非特异条带就切胶回收。
酶是说有0.5u，浓度是多少啊？50的体系一般酶需要1.5-2U吧。

实验！成果！文章！毕业！工作！

13楼2013-10-30 10:08:48

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