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dongjingjia

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下

试剂        使用量
ddH2O        36.5µl
10× EasyTaq Buffer        5μL
dNTPs        4μL
特异引物P1        1μL
特异引物P2        1μL
拟南芥、水稻cDNA模板        2μL
EasyTaq DNA Polymerase        0.5μL
总体积        50μL
PCR扩增程序如下：95℃ 5min；（95℃ 30S；53℃ 40S；72℃ 2min）×30cycles；
72℃ 10min；4℃保温。
PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下
PCR结果图
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1楼 2013-10-27 11:25:39
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Autumngrain

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 12:47:56
一，提高退火温度（建议用PCR仪做一个温度梯度。）
二，换primer，目测非特异性条带比较多（去NCBI Primer-BLAST检测引物特异性）。
三，请说明具体电泳时间， marker大小，凝胶浓度，以及primer浓度。
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12楼2013-10-29 12:31:26
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)
主要是后面几个条带不是很清楚，请问一下大家怎么解决
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2楼2013-10-27 11:28:38
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dongjingjia: 金币+2, ★有帮助 2013-10-27 11:40:20
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-27 17:44:23
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。
赞一下 回复此楼
有些东西因为得不到而变得美好，有些东西因为拥有而变得弥足珍贵！
3楼2013-10-27 11:36:36
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dongjingjia

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 867575969 at 2013-10-27 11:36:36
你有7个样本吗？可以适当提高退火温度试试，减少非特异性条带。

不是有6个样本，只是第离maker最近的条带没有跑出来，前三个泳道是一个gene，中间空了一个，后三个泳道又是另一个基因，用同一台PCR，P的，后三个不是太好，所以不知道是不是改改体系，或者其他的
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4楼2013-10-27 11:43:18
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