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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA上样量的问题
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yqs129219

新虫 (小有名气)

[求助] RNA上样量的问题已有1人参与

1：求教一般RNA上样量为多少ng，RNA浓度计算=OD260x稀释倍数x40/1000单位是ug/ml，不就是ng/ul么？求教是否正确
2：另外求教RNA电泳用变性胶最好么？好像比较麻烦。TAE可以把？
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1楼2012-06-26 21:31:11
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-27 13:39:39
1、小孔的梳子上样100-200ng；中孔的可以上样400-500ng。A260X40X稀释倍数即为浓度了吧，单位ng/ul(=ug/ml)。
2、变性胶较好，不过麻烦，跑变性胶可以避免电泳过程的降解。一般的检测跑普通的琼脂糖凝胶即可。TAE、TBE均可。
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伟大航线....
2楼2012-06-27 08:47:57
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-27 13:39:49
如果不是实验的特殊要求，只是为了看看提取的RNA是否好，就跑个普通的琼脂糖凝胶电泳就可以，1%的。我提取的RNA大概是500ng/ul，点样5ul。
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3楼2012-06-27 09:12:11
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-27 13:39:56
我们一般上样700-800ng/ul，检测RNA的质量跑琼脂糖凝胶电泳即可，可以分析跑出条带的峰型，看有无基因组和蛋白或者下分子多分多糖的影响
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4楼2012-06-27 09:24:27
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yqs129219

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2012-06-27 08:47:57
1、小孔的梳子上样100-200ng；中孔的可以上样400-500ng。A260X40X稀释倍数即为浓度了吧，单位ng/ul(=ug/ml)。
2、变性胶较好，不过麻烦，跑变性胶可以避免电泳过程的降解。一般的检测跑普通的琼脂糖凝胶即可。TAE、 ...

网上很多浓度计算都有写那个除以1000的
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5楼2012-06-27 15:52:55
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-28 15:51:03
1、我们一般电泳检测时取RNA的量是1微升，太少了不好取，枪头上再沾点儿，感觉上到加样孔的没多少。
2、平时检测RNA是否降解只用普通胶，0.8%的，TAE的；如果要做northern的话，才用甲醛变性胶电泳。
3、RNA浓度计算=OD260x稀释倍数x40/1000单位是ug/ul
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
6楼2012-06-27 16:17:40
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yqs129219 at 2012-06-27 15:52:55
网上很多浓度计算都有写那个除以1000的...

看最后的单位，换算而已
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伟大航线....
7楼2012-06-28 09:03:28
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李晓宏东华

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
梳子上样100-200ng；中孔的可以上样400-500ng。A260X40X稀释倍数即为浓度了吧，单位ng/ul(=ug/ml)。
2、变性胶较好，不过麻烦，跑变性胶可以避免电泳过程的降解。一般的检测跑普通的琼脂糖凝胶即可。TAE、TBE均可。
  最后多多看看实验书籍请教老师
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8楼2012-06-28 20:37:06
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ccttss1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

电泳检测我一般点2微升，1%琼脂糖凝胶，1XTAE，每次只能看到2条带，第三条基本没看到过（可能是跑的时间短，都是10几分钟，然后急着转cDNA了），如果要求高的话还是用变性胶好。
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9楼2014-01-22 13:06:41
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