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幽幽蓝

新虫 (小有名气)

[求助] 求助RNA浓度的问题

各位大侠,请问检测RNA浓度时会在230和280的地方出现两个峰,而260的地方却没有峰,是怎么回事呢?
同样的血清样本,有的检查出来的RNA浓度很低100+点,有的却高达3000+多,实验室的老师说没有必要跑电泳,是这样吗?
本人没有搞过实验,不懂,紧急求助
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不开口,没有人知道你想要什么;不去做,任何想法都只在脑海里游泳;不迈出脚步,永远找不到你前进的方向
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andy99990000

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

幽幽蓝(金币+10): 2011-05-31 17:07:14
对于纯度,无论RNA还是DNA,你要看的就是260/280这个数值,注意是比值而不是单独的看绝对值或峰值。一般这个值在1.8 - 2.0,被视为纯度较高,可以继续你的后续实验,不然就要纯化。

对于浓度,这个就要看你后续实验的需求量了,由于提总RNA时浓度随着样品的不同,其产量差异的确会比较大,你的情况也是正常,我建议如果以前没有做过,那么继续你的实验,提纯时是可以多次样品一起做的,所以前期不必担心太多,总量到时能够达到就行。
2楼2011-05-30 03:40:57
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幽幽蓝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by andy99990000 at 2011-05-30 03:40:57:
对于纯度,无论RNA还是DNA,你要看的就是260/280这个数值,注意是比值而不是单独的看绝对值或峰值。一般这个值在1.8 - 2.0,被视为纯度较高,可以继续你的后续实验,不然就要纯化。

对于浓度,这个就要看你后续 ...

恩,谢谢啊,因为样本珍贵,丢失一个就不会再有,所以只有继续,呵呵
不开口,没有人知道你想要什么;不去做,任何想法都只在脑海里游泳;不迈出脚步,永远找不到你前进的方向
3楼2011-05-30 15:57:46
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seahow

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

260不会没有峰值的,再看看是否错了; 如楼上所说,260/280是纯度的代表,不过,你用trizol一般不会超过1.8的,1.6既可以接受的;

至于230那时金属离子。
4楼2011-05-31 14:51:51
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seahow

木虫 (著名写手)

关于,是否跑胶 我到觉得没有必要,因为每次跑胶很麻烦,而且条件苛刻,以医学生水平,很难胜任的;因此,跑胶后 你也做不出什么干脆的判断,呵呵、
如果,条件摸好后,不必每次跑胶。
5楼2011-05-31 14:54:36
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洪娜2012

新虫 (初入文坛)

今天试剂盒提的总RNA浓度1400,260/280 2.2,感觉还可以。可是纯化后的浓度很低,OD值也不好。怎么回事呢?难道是纯化过程中污染了?
6楼2013-05-28 22:00:37
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