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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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荣rong006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RNA浓度的问题 已有7人参与

请教做RNA方面的虫友:我提的RNA吸光度检测是A260/A280=2.67,明显大于2,原因是什么呀?跑出来的两条带18s就很亮,28s带却不是很清楚。是杂质污染还是浓度太大?
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-01-21 15:51:33
OD260/OD280比值是衡量RNA样品中蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA样品,OD260/OD280值(10mM Tris, pH7.5)在2.0左右。
OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品,假定在10mM Tris,pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数在1.8-2.1之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。(摘自某公司TRIZOL试剂说明书)
相信自己的路。坚持并享受其中。
2楼2011-01-21 12:28:02
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)

一般来说我自己测的没有碰到过2.0以上的,都是在2以下,太低的话会是蛋白杂质在里面,这么高有可能是核酸污染,或者是浓度太高超出机器的测量曲线了吧。
相信自己的路。坚持并享受其中。
3楼2011-01-21 12:29:27
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荣rong006

新虫 (小有名气)

如果是这样的话,对做RT-PCR有影响吗?
4楼2011-01-21 15:46:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

★ ★
翱宇(金币+2): 谢谢交流,一般只要RNA提取的没有问题,基本都是溶解是的问题吧 2011-01-21 16:36:47
最好的鉴定方法是电泳,电泳问题不大就可以进一步RTPCR。
楼主的情况应当考虑一下稀释RNA的缓冲液是否有问题。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
5楼2011-01-21 15:52:25
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荣rong006

新虫 (小有名气)

我用的是TE来溶解的RNA,有影响吗?
6楼2011-01-21 15:56:13
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2011-01-21 19:33:55
你跑RNA时,检测RNA的质量,要用RNA的loading buffer 不要用DNA的那一套,而且作胶的板子最好以DEPC水洗洗,梳子也是。
7楼2011-01-21 16:38:44
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励参与交流~~~ 2011-01-24 08:40:05
主要看看是否有smear,如果很干净,条带清晰完整,即便基本看不到28s,也没关系
8楼2011-01-23 22:51:29
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lhsw0826

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的RNA吸光度检测值大于2,表明你提取的RNA降解的比较厉害,这从你凝胶电泳图中28S不明显就可以再次得到验证。RNA的降解是从大片段开始,28S不明显,就是表明有RNA降解产生。
希望对你有帮助!
9楼2013-05-29 15:34:58
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hardytam

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
rna降解了,可能降解成单核苷酸了。
10楼2013-07-11 22:05:01
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