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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA浓度的问题
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荣rong006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RNA浓度的问题 已有7人参与

请教做RNA方面的虫友：我提的RNA吸光度检测是A260/A280=2.67,明显大于2，原因是什么呀？跑出来的两条带18s就很亮，28s带却不是很清楚。是杂质污染还是浓度太大？
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1楼 2011-01-21 12:11:27
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-01-21 15:51:33
OD260/OD280比值是衡量RNA样品中蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA样品，OD260/OD280值（10mM Tris, pH7.5）在2.0左右。
OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数在1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。（摘自某公司TRIZOL试剂说明书)
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相信自己的路。坚持并享受其中。
2楼2011-01-21 12:28:02
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)
一般来说我自己测的没有碰到过2.0以上的，都是在2以下，太低的话会是蛋白杂质在里面，这么高有可能是核酸污染，或者是浓度太高超出机器的测量曲线了吧。
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相信自己的路。坚持并享受其中。
3楼2011-01-21 12:29:27
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荣rong006

新虫 (小有名气)
如果是这样的话，对做RT-PCR有影响吗？
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4楼2011-01-21 15:46:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★
翱宇(金币+2): 谢谢交流，一般只要RNA提取的没有问题，基本都是溶解是的问题吧 2011-01-21 16:36:47
最好的鉴定方法是电泳，电泳问题不大就可以进一步RTPCR。
楼主的情况应当考虑一下稀释RNA的缓冲液是否有问题。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
5楼2011-01-21 15:52:25
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荣rong006

新虫 (小有名气)
我用的是TE来溶解的RNA，有影响吗？
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6楼2011-01-21 15:56:13
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-01-21 19:33:55
你跑RNA时，检测RNA的质量，要用RNA的loading buffer 不要用DNA的那一套，而且作胶的板子最好以DEPC水洗洗，梳子也是。
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7楼2011-01-21 16:38:44
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励参与交流~~~ 2011-01-24 08:40:05
主要看看是否有smear，如果很干净，条带清晰完整，即便基本看不到28s，也没关系
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8楼2011-01-23 22:51:29
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lhsw0826

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的RNA吸光度检测值大于2，表明你提取的RNA降解的比较厉害，这从你凝胶电泳图中28S不明显就可以再次得到验证。RNA的降解是从大片段开始，28S不明显，就是表明有RNA降解产生。
希望对你有帮助！
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9楼2013-05-29 15:34:58
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hardytam

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
rna降解了，可能降解成单核苷酸了。
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10楼2013-07-11 22:05:01
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