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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 关于SYBR半定量荧光定量PCR的问题求助
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luizing

银虫 (正式写手)

[交流] 关于SYBR半定量荧光定量PCR的问题求助

我做SYBR荧光半定量PCR，没有测RNA浓度就反转录成cDNA，
后来看论坛上说要预先测RNA浓度，再取相同的RNA量做逆转录为cDAN,再以此cDNA为模板做定量PCR。
现在我没有测RNA浓度，请问做内参可以解决这个问题吗？
这样做的结果可信吗？
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1楼 2011-03-04 22:40:37
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mafang68

金虫 (著名写手)
luizing(金币+10, 博学EPI+1): 谢谢你的回答，多交流！ 2011-03-05 19:03:48
我做RT-pcr就没有测过RNA浓度，各组浓度相差不大，从内参的起峰循环数就可以看出。就算差点，稀释十倍后也差不到哪去了。当然你不能让各组相差太多，确保各组内参在15个循环左右起峰最好。各组都是拿内参作比较，所以结果木有多大问题。
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2楼2011-03-05 08:57:56
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
没有多大问题，但是如果用Delta ct法，最好要标准曲线斜率相近，就是扩增效率要一至，不然结果不可信。因为此法有几个关键假设。如果扩增效率不一至的时候，模板量接近，误差越小。正常情况，扩增效率不会完全一至，所以控制模板量接近，可以最小化误差。
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3楼2011-12-20 00:54:47
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