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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

[求助] DNA琼脂糖凝胶电泳

我提了枇杷叶的DNA ,测的OD值在2.12,是蛋白没除干净还是RNA的干扰?还有0.8%的琼脂糖凝胶电泳出现了好几条条带是什么原因呢?是双链断了吗?
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haha
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wxlzzzz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-11-19 13:35:57
楼主想表达的不是OD值吧,和DNA纯度有关系的是OD260/OD280和OD260/OD230这两个参数。
OD260/0D280=1.8时,理论值,DNA纯净。小于1.8有蛋白或者酚类污染,大于1.8有RNA污染。
基因组DNA长度长,提取过程中很容易断开成小段,楼主提取时候要注意这点。祝好运。

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你做了什么,什么都没做。
2楼2012-11-15 23:48:40
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haiyanli1988

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的RNA去除干净了吗?RNA没有除干净跑胶会出现几天带很正常啊,OD值2.12,说明你的样品有RNA污染。

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4楼2012-11-16 11:07:46
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普通回帖

hourl11

禁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

3楼2012-11-16 08:57:25
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxlzzzz at 2012-11-15 23:48:40
楼主想表达的不是OD值吧,和DNA纯度有关系的是OD260/OD280和OD260/OD230这两个参数。
OD260/0D280=1.8时,理论值,DNA纯净。小于1.8有蛋白或者酚类污染,大于1.8有RNA污染。
基因组DNA长度长,提取过程中很容易断 ...

嗯,就是OD260/0D280=2.12,没有加RNA酶,因为听人家说RNA很不稳定,会很快自己降解的.是这样吗?还有提取的时候,也好小心了,可是还是断了!
haha
5楼2012-11-16 21:36:07
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hourl11 at 2012-11-16 08:57:25
你传一张图上来看一下呗

因为只是在紫外灯下看的,所以没拍照啊!
haha
6楼2012-11-16 21:36:51
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by haiyanli1988 at 2012-11-16 11:07:46
你的RNA去除干净了吗?RNA没有除干净跑胶会出现几天带很正常啊,OD值2.12,说明你的样品有RNA污染。

RNA没除尽会出现多条带吗?意思是DNA带RNA带吗?
haha
7楼2012-11-16 21:38:14
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wxlzzzz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:36:09
楼主,不能认定其他的条带就一定是断裂的DNA片段,最好做几个验证试验。加点RNA酶试一试,或者故意在提取的时候加大机械搅拌,有时候失败的实验是一种很好的参照经验啊。建议先做添加RNA酶的,因为你的OD比值的确高了,查查相关资料看看怎么用RNA酶,祝好运~

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你做了什么,什么都没做。
8楼2012-11-17 09:38:50
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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OD值在2.12,应该是dna断裂了。
coasttocoast。
9楼2012-11-17 10:06:10
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-19 13:36:18
DNA提取的过程是免不了有断裂出现,只是多与少的问题.DNA抽提出现多条带或者拖尾的现象都是比较正常的,RNA是比较容易降解,但是在抽提完之后立刻跑胶的话量是很大的,对电泳的影响也很大。希望对你有帮助,有其他具体问题可以直接给我写邮件。

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10楼2012-11-17 11:52:32
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