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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于PCR中测RNA完整性的琼脂糖变性凝胶电泳实验已有4人参与

最近要做QRTPCR，RNA提取后想测下RNA完整性，RNA琼脂糖变性凝胶电泳实验的方案搜索了很多用TAE TBE MOPS缓冲液的都有。筒子们谁做过，能提供给一份详细点的试验流程的，万分感谢啊

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1楼2014-02-26 23:49:45

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tangqing小木

金虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lanlvmaomao(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 22:02:01

实验步骤：
(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
(2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
(3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
试剂：
(1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。
(2)上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。
(3)甲醛。
(4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。