应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR中测RNA完整性的琼脂糖变性凝胶电泳实验
131/2返回列表12下一页
查看: 2900  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR中测RNA完整性的琼脂糖变性凝胶电泳实验 已有4人参与

最近要做QRTPCR，RNA提取后想测下RNA完整性，RNA琼脂糖变性凝胶电泳实验的方案搜索了很多用TAE TBE MOPS缓冲液的都有。筒子们谁做过，能提供给一份详细点的试验流程的，万分感谢啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-26 23:49:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么物种的RNA？
可以跑Agilent Bioanalyzer 2100，会直接给一个RIN值，根据这个判断RNA完整性，是很常用并且被广泛接受的方法。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-02-27 15:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-27 13:02:10
....
    最标准的是用甲醛变性电泳，如果嫌麻烦，就用普通TAE/TBE琼脂糖电泳就成了，主要注意清洗好槽子、梳子制胶盒等，一般是拿高浓度NaOH来泡，DEPC水冲

TAE缓冲液怎么配置呢，我没有跑过DNA电泳。。。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-02-27 15:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangqing小木

金虫 (初入文坛)
★
lanlvmaomao(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-02-28 22:01:08
引用回帖:
8楼: Originally posted by lanlvmaomao at 2014-02-27 21:41:55
非常感谢，我想用TEB也没什么关系吧...

正规做RNA电泳应该使用MOPS缓冲液（含甲醛），而且所有的器具需用DEPC水处理，以防RNA降解，MOPS不贵，如果需要可参照分子克隆实验指南自己配制。如果RNA电泳只是观察RNA是否完整，以后实验需要，用普通跑胶也能出来，就是用TBE了，我们也做过，没问题，注意器具一般清洁，跑胶时间不要太长，可以的，用1.5%的胶。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2014-02-28 09:13:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangqing小木

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lanlvmaomao at 2014-02-28 09:19:22
是的，我只是想看看RNA是否完整，那您说我还需要点maker么，需要的话，是把买的maker直接加到点样孔么，非常感谢啦...

MARKER是不需要的
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2014-02-28 09:29:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-27 11:00:16
本帖内容被屏蔽
2楼2014-02-27 02:38:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-28 22:02:53
正如楼上所说，的确是跟跑DNA是一样的，配1.5%左右的胶，用1X TAE跑就可以了
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-02-27 11:00:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
lanlvmaomao(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-02-28 22:02:24
....
    最标准的是用甲醛变性电泳，如果嫌麻烦，就用普通TAE/TBE琼脂糖电泳就成了，主要注意清洗好槽子、梳子制胶盒等，一般是拿高浓度NaOH来泡，DEPC水冲
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
4楼2014-02-27 13:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangqing小木

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lanlvmaomao(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 22:02:01
实验步骤：
(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
    (2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
    (3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
试剂：
    (1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。
    (2)上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。
    (3)甲醛。
    (4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。
赞一下 回复此楼
7楼2014-02-27 16:14:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tangqing小木 at 2014-02-27 16:14:09
实验步骤：
(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
    (2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样 ...

非常感谢，我想用TEB也没什么关系吧
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-27 21:41:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by tangqing小木 at 2014-02-28 09:13:23
正规做RNA电泳应该使用MOPS缓冲液（含甲醛），而且所有的器具需用DEPC水处理，以防RNA降解，MOPS不贵，如果需要可参照分子克隆实验指南自己配制。如果RNA电泳只是观察RNA是否完整，以后实验需要，用普通跑胶也能出 ...

是的，我只是想看看RNA是否完整，那您说我还需要点maker么，需要的话，是把买的maker直接加到点样孔么，非常感谢啦
赞一下 回复此楼
10楼2014-02-28 09:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lanlvmaomao 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 接收调剂 +6 津萌津萌 2026-03-02 14/700 2026-03-02 20:59 by 汪！？！
[考研] 化工335求调剂 +3 摸摸猫猫头 2026-03-02 3/150 2026-03-02 20:55 by 平凡的七月
[考研] 085600求调剂 +4 LRZZZZZZ 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:33 by 云旗yunqi
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+5 ，！？ 2026-03-02 7/350 2026-03-02 20:27 by hypershenger
[考研] 272求调剂 +9 材紫有化 2026-02-28 9/450 2026-03-02 20:22 by hypershenger
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 3/150 2026-03-02 19:59 by hypershenger
[考研] 275求调剂 +7 明远求学 2026-03-01 7/350 2026-03-02 19:22 by zhukairuo
[考研] 化工京区271求调剂 +6 11ing 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:52 by caszguilin
[考研] 290求调剂 +6 ErMiao1020 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:14 by lature00
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 14/700 2026-03-02 16:09 by 今夏不夏
[考研] 338求调剂 +3 18162027187 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:12 by houyaoxu
[考研] 材料与化工328求调剂 +3 。，。，。，。i 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:09 by houyaoxu
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭