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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物检测，点不上样。。。
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR产物检测，点不上样。。。

怪事年年有啊！昨天晚上做的PCR，上午跑胶检测，除了一个样品能够点到胶孔里，其他的都点不进去。。。请教各位大侠，有没有遇到相似情况，什么原因。。。
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1楼 2013-08-16 15:14:38
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yimingwang

金虫 (小有名气)
★
hechuguiqu11(金币+1): 谢谢参与
多家一点loading dye，loading buffer 换一下，就进去了。
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2楼2013-08-16 15:50:38
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秋水素心

银虫 (小有名气)
★
hechuguiqu11(金币+1): 谢谢参与
查下配胶用的buffer浓度
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3楼2013-08-16 16:54:18
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xingjiuwcc

木虫 (著名写手)
★
hechuguiqu11(金币+1): 谢谢参与
怎么会点不进去，蓝色样液飘出来了还是怎么的
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4楼2013-08-16 17:59:46
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duanepp

木虫 (小有名气)
★
hechuguiqu11(金币+1): 谢谢参与
胶没有做好
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6楼2013-08-17 07:34:18
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
上样胶孔底部漏了，或点样时出问题，但这可能性几乎为0。自己上过未加loading buffer的核酸，只有3ul左右，没出问题。
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7楼2013-08-17 08:25:16
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N323

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是胶做的时间太长了，胶空皱缩了？
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8楼2013-08-17 08:28:50
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amareyue

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到过几次，就是点进去它会自己跑出来是不是？那是我刚开始做实验的时候遇到的，做久了没再遇到过这种情况，可能是胶的问题，再做一块试试

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9楼2013-08-17 09:47:07
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yujitianqing at 2013-08-17 08:25:16
上样胶孔底部漏了，或点样时出问题，但这可能性几乎为0。自己上过未加loading buffer的核酸，只有3ul左右，没出问题。

亲，上样胶孔没漏，我用以前跑的PCR产物，可以点进去。。。
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10楼2013-08-17 15:36:19
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by duanepp at 2013-08-17 07:34:18
胶没有做好

我重新做了一块，还是不行，而且当时点样，有的样品（PCR过程中部分挥发的样品）能点进去，其他的就点不上。
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11楼2013-08-17 15:37:49
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by amareyue at 2013-08-17 09:47:07
我也遇到过几次，就是点进去它会自己跑出来是不是？那是我刚开始做实验的时候遇到的，做久了没再遇到过这种情况，可能是胶的问题，再做一块试试

嗯嗯，是啊！刚开始明明进去了，转眼间就飘出来扩散掉了！我做这个两年了，第一次遇到这种情况。。。
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12楼2013-08-17 15:39:09
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by N323 at 2013-08-17 08:28:50
是不是胶做的时间太长了，胶空皱缩了？

我做了块新的，还是这种情况。。。
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13楼2013-08-17 15:39:40
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-08-16 16:54:18
查下配胶用的buffer浓度

配胶一直用的1*TAE。。。
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14楼2013-08-17 15:40:23
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-16 15:50:38
多家一点loading dye，loading buffer 换一下，就进去了。

虫友的意思是换一下PCRmix吗？我们一直用的那家的，没出过问题的。。。且别人也用相同的试剂，也没出现过这种情况。
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15楼2013-08-17 15:45:18
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yxliu

金虫 (小有名气)
★
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如果不是蓝酶就要加Loading Buffer吧。如果是Master mix，你换个酶试试呢。
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16楼2013-08-17 16:14:46
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
★
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你的PCR产物浓度是不是很高，如果是加多点Loading Buffer，这个Loading Buffer本来就是使DNA或RNA沉淀下来方便上样及标记用的！一般样品上样量：上样缓冲液为5:1，但加大上样缓冲液的量不会有很大的影响的。上样的时候，样品和上样缓冲液混匀，配好胶，应该会没问题的。祝好。
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17楼2013-08-18 11:25:03
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-08-18 11:25:03
你的PCR产物浓度是不是很高，如果是加多点Loading Buffer，这个Loading Buffer本来就是使DNA或RNA沉淀下来方便上样及标记用的！一般样品上样量：上样缓冲液为5:1，但加大上样缓冲液的量不会有很大的影响的。上样的时 ...

谢谢！
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18楼2013-08-18 20:28:46
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暗星

银虫 (小有名气)
★
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是不是在点样是将石蜡油吸取到枪头里了，这样看着可以点进去，但是一会又会漂上来！
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19楼2013-08-19 16:47:45
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 暗星 at 2013-08-19 16:47:45
是不是在点样是将石蜡油吸取到枪头里了，这样看着可以点进去，但是一会又会漂上来！

谢谢！但是我做PCR时并没有加石蜡油。。。
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20楼2013-08-28 10:17:59
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RUI1990

银虫 (小有名气)
★
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这种情况貌似还是loading buffer的原因吧！仅路过~~~
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21楼2013-08-28 14:10:58
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yingying15885楼
2013-08-16 21:16   回复  
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