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提取的RNA 浓度低还能做电泳检测质量吗？
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| 最近提取体外诱导的软骨组织标本的RNA时，发现浓度很低，才5ng/ul 左右。想做电泳检测RNA质量，但查了资料好像点样没有固定的标准，但似乎一般要求RNA的点样量都要在1ug（或以上），照这样我提取的RNA没法做电泳了（要加200ul RNA）。可我几次提得浓度最高的RNA样本也就197ng/ul... 本想如果电泳检测RNA没降解的话，就准备做逆转录PCR 来检测某种基因，现在卡壳进行不下去了。晕，求教高手，还有没有什么办法？ |
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凌波丽
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+4, 丽美眉，打个招呼哈 2013-04-21 18:20:18
amisking: 回帖置顶 2013-04-21 19:45:51
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RNA浓度低，就纯化浓缩一下吧。 步骤如下（不唯一，仅供参考） RNA样品用相同体积的酚/氯仿（酚和氯仿各50%体积，浓度参照RNAzol试剂盒）装入一有盖离心管离心10000rpm室温15s，水相移入另一离心管，重复以上操作直到两相间没有蛋白质沉淀为止，这样蛋白质基本上就去掉了。之后可以用核酸沉淀法回收核酸，2-4度，10000rpm离心15min，取上清液。上清液中加入等量异丙醇，颠倒数次，室温静置约10min。再2-4度，10000rpm离心10min，弃上清液。用70%乙醇洗涤RNA沉淀，静置约1min。又2-4度，8500rpm离心5min，弃上清液。然后装入Ep管，离心真空抽干数分钟。最后少量用DEPC处理过的双蒸馏水溶解后测电泳，大多数低温保存。 |
2楼2013-04-21 17:14:44
3楼2013-04-21 18:53:47
4楼2013-04-21 20:06:11
