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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] 想咨询一下关于RNA电泳的问题。谢谢!

我提取的rna 准备跑电泳,但是看见有人说什么变性凝胶电泳和非变性凝胶电泳,我想问一下这两个有什么区别,我用的是琼脂糖凝胶属于什么?是应该用TBE溶液还是TAE溶液,有什么区别。配置的溶液需要是无酶无菌的么?是否得用depc处理过得水配置。谢谢啦!希望每个问题都得到回答。
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:34:09
guyue900905: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-02 16:13:48
如果不是非常精确的实验,只是看RNA质量,可以用琼脂糖来跑,无需DEPC水处理,跑胶电压稍微大一点,跑胶时间短一点。具体浓度可以用分光光度计来测定。如果想知道其具体分子量,需要用变性胶来跑,把你的RNA及MARKER均变性处理。TAE,TBE只是乙酸硼酸配置的区别,PH略有不同,后者缓冲能力强一些。
2楼2012-08-02 10:50:46
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-02 10:50:46
如果不是非常精确的实验,只是看RNA质量,可以用琼脂糖来跑,无需DEPC水处理,跑胶电压稍微大一点,跑胶时间短一点。具体浓度可以用分光光度计来测定。如果想知道其具体分子量,需要用变性胶来跑,把你的RNA及MARKE ...

那跑电泳的槽子梳子什么的用特别处理么?我的电泳图基本看不到28s和18s,我是用研钵提的,我用的是200v,5min可以么?谢谢啦!
3楼2012-08-02 16:05:24
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chenguestc

木虫 (职业作家)

严格来说是需要处理的,包括跑胶的电机缓冲液都要用DEPC配置,但是如果是为了粗略看下质量,个人觉得无需处理。如果要做反转录以及QPCR,最好质量好一点。电泳时间根据指示剂把,不能一概说多少分钟,个人觉得200V,5-10分钟应该足够。
4楼2012-08-02 19:45:50
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jl860822

金虫 (正式写手)


建议先跑胶,就用跑DNA的就可以,电压150v跑20min或更短时间,然后测一下样品浓度
5楼2012-08-02 19:49:08
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

只看有没有降解,直接用DNA跑胶的跑,注意枪头那些处理一下就好了。免得污染本身样品。150V,10mins就可以了。。200V太大了,整个电泳槽都烫了。。
6楼2013-05-08 11:40:55
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