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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] 想咨询一下关于RNA电泳的问题。谢谢！

我提取的rna 准备跑电泳，但是看见有人说什么变性凝胶电泳和非变性凝胶电泳，我想问一下这两个有什么区别，我用的是琼脂糖凝胶属于什么？是应该用TBE溶液还是TAE溶液，有什么区别。配置的溶液需要是无酶无菌的么？是否得用depc处理过得水配置。谢谢啦！希望每个问题都得到回答。
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1楼 2012-08-02 10:42:28
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chenguestc

木虫 (职业作家)
严格来说是需要处理的，包括跑胶的电机缓冲液都要用DEPC配置，但是如果是为了粗略看下质量，个人觉得无需处理。如果要做反转录以及QPCR，最好质量好一点。电泳时间根据指示剂把，不能一概说多少分钟，个人觉得200V，5-10分钟应该足够。
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4楼2012-08-02 19:45:50
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:34:09
guyue900905: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-02 16:13:48
如果不是非常精确的实验，只是看RNA质量，可以用琼脂糖来跑，无需DEPC水处理，跑胶电压稍微大一点，跑胶时间短一点。具体浓度可以用分光光度计来测定。如果想知道其具体分子量，需要用变性胶来跑，把你的RNA及MARKER均变性处理。TAE,TBE只是乙酸硼酸配置的区别，PH略有不同，后者缓冲能力强一些。
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2楼2012-08-02 10:50:46
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guyue900905

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-02 10:50:46
如果不是非常精确的实验，只是看RNA质量，可以用琼脂糖来跑，无需DEPC水处理，跑胶电压稍微大一点，跑胶时间短一点。具体浓度可以用分光光度计来测定。如果想知道其具体分子量，需要用变性胶来跑，把你的RNA及MARKE ...

那跑电泳的槽子梳子什么的用特别处理么？我的电泳图基本看不到28s和18s，我是用研钵提的，我用的是200v，5min可以么？谢谢啦！
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3楼2012-08-02 16:05:24
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jl860822

金虫 (正式写手)
建议先跑胶，就用跑DNA的就可以，电压150v跑20min或更短时间，然后测一下样品浓度
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5楼2012-08-02 19:49:08
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