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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA电泳~~~请高手指点

RNA电泳分变性和非变性的两种,但是不知道在何种情况下运用呢,我查了一些资料说变性的可以按分子量将RNA分开,貌似是比较精确的做法。我提取的是昆虫的腹部总RNA,检测完整度和纯度的话,是用非变性的还是用变性的呢?请高指点啊,搜索了下没有很明确的答案。
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, MolEPI+1): 鼓励应助 2011-08-17 20:18:52
光看这个的话非变性就可以了。就用普通的DNA琼脂糖凝胶电泳的那套东东,100V,15分钟就差不多了。
如果混有基因组DNA,会在靠近加样孔的地方看到模糊条带;完整度的话,主要看5s和18s(不知昆虫是多少S)两条亮带,如果别降解了会看到拖尾。不过RNA各种大小都有,所以看到整个泳道模糊的一片是正常的,这个要跟拖尾现象区分开来哦。
还有,虽然跟DNA电泳的东西一样,但是最好弄一套跑RNA电泳专用的。实在没有的话,跑RNA之前,把电泳槽的缓冲液换成新的,也OK。
2楼2011-08-17 13:07:01
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-08-17 13:07:01:
光看这个的话非变性就可以了。就用普通的DNA琼脂糖凝胶电泳的那套东东,100V,15分钟就差不多了。
如果混有基因组DNA,会在靠近加样孔的地方看到模糊条带;完整度的话,主要看5s和18s(不知昆虫是多少S) ...

多谢啊!我准备用非变性的跑下试试呢,电泳液都换了,用的是DEPC水配的1XTAE缓冲液。
3楼2011-08-17 14:53:48
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanghd2826 at 2011-08-17 14:53:48:
多谢啊!我准备用非变性的跑下试试呢,电泳液都换了,用的是DEPC水配的1XTAE缓冲液。

呵呵,不客气!这样做就OK了。不过我们实验室跑RNA的话,也是普通纯水配的TAE,DEPC太毒,大家都不想弄,幸好也没有出现过问题,哈哈~
4楼2011-08-17 15:07:21
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

恩 多谢了!
5楼2011-08-17 17:12:03
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