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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的RNA 浓度低还能做电泳检测质量吗？
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revivor

银虫 (小有名气)

[求助] 提取的RNA 浓度低还能做电泳检测质量吗？

最近提取体外诱导的软骨组织标本的RNA时，发现浓度很低，才5ng/ul 左右。想做电泳检测RNA质量，但查了资料好像点样没有固定的标准，但似乎一般要求RNA的点样量都要在1ug（或以上），照这样我提取的RNA没法做电泳了（要加200ul RNA）。可我几次提得浓度最高的RNA样本也就197ng/ul... 本想如果电泳检测RNA没降解的话，就准备做逆转录PCR 来检测某种基因，现在卡壳进行不下去了。晕，求教高手，还有没有什么办法？
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1楼2013-04-21 16:47:00
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+4, 丽美眉，打个招呼哈 2013-04-21 18:20:18
amisking: 回帖置顶 2013-04-21 19:45:51
RNA浓度低，就纯化浓缩一下吧。
步骤如下（不唯一，仅供参考）
RNA样品用相同体积的酚/氯仿（酚和氯仿各50%体积，浓度参照RNAzol试剂盒）装入一有盖离心管离心10000rpm室温15s，水相移入另一离心管，重复以上操作直到两相间没有蛋白质沉淀为止，这样蛋白质基本上就去掉了。之后可以用核酸沉淀法回收核酸，2-4度，10000rpm离心15min，取上清液。上清液中加入等量异丙醇，颠倒数次，室温静置约10min。再2-4度，10000rpm离心10min，弃上清液。用70%乙醇洗涤RNA沉淀，静置约1min。又2-4度，8500rpm离心5min，弃上清液。然后装入Ep管，离心真空抽干数分钟。最后少量用DEPC处理过的双蒸馏水溶解后测电泳，大多数低温保存。
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2楼2013-04-21 17:14:44
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aqp2

新虫 (初入文坛)
我的和你的一样，rt完了，p不出来。做不下去了？求高手指点啊/
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3楼2013-04-21 18:53:47
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revivor

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-04-21 17:14:44
RNA浓度低，就纯化浓缩一下吧。
步骤如下（不唯一，仅供参考）
RNA样品用相同体积的酚/氯仿（酚和氯仿各50%体积，浓度参照RNAzol试剂盒）装入一有盖离心管离心10000rpm室温15s，水相移入另一离心管，重复以上操作 ...

我按照试剂盒的说明书提RNA ，最后都是收集100ul 的RNA 溶液。而如果按照5ng/ul的浓度，总量也就0.5ug。就是浓缩了也还是0.5ug，似乎根本达不到电泳的上样量的标准啊，这怎么办？
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4楼2013-04-21 20:06:11
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