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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蛋白电泳时loading buffer的配制
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baobao包包

金虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白电泳时loading buffer的配制

最近配制蛋白电泳的loading buffer，遇到了几个问题，还请前辈们指教：
1、pH是配制Tris 的时候调节还是最后再调节？
2、SDS溶解之后很容易凝，为什么？
3、所有样品加入后，为什么需要过滤？过滤掉什么？
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1楼2012-12-10 20:10:48
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-12-11 09:01:30
1. 都可以，用先调好的会比较方便
2. 是指析出吗？可能是气温低的缘故，SDS在低温很容易析出
3. 如果用的试剂够好的话，不过滤也是没啥影响的，过滤可能是考虑到溴酚蓝、SDS之类的有不溶的物质，可能会影响电泳或者你蛋白样品的制作
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3楼2012-12-10 21:04:25
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普通回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币-10, 应助指数-2, 屏蔽内容, 违规存档, 毫无意义的垃圾广告 2012-12-11 09:00:28
本帖内容被屏蔽
2楼2012-12-10 20:50:00
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)
没自己做过  我们一般都买
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快乐奋斗，创造所有。
4楼2012-12-11 08:38:46
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没做过，但是常识性的调PH应该是在最后一步调吧。
正如别人所说的，买现成的，省时间，减少误差
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5楼2012-12-11 08:56:13
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laoboshihou

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 都可以，用先调好的会比较方便
2. 是指析出吗？可能是气温低的缘故，SDS在低温很容易析出
3. 如果用的试剂够好的话，不过滤也是没啥影响的，过滤可能是考虑到溴酚蓝、SDS之类的有不溶的物质，可能会影响电泳或者你蛋白样品的制作
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6楼2012-12-11 09:09:18
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.Tris用先调好的
2.SDS低温容易析出
3.试剂纯度高的话，不用过滤。
如果你加入DTT或者巯基乙醇的话，建议分装到1.5的Ep管中，于-20冰箱长期保存。
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天道酬勤
7楼2012-12-12 15:52:43
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baobao包包

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wchuangqi at 2012-12-12 15:52:43
1.Tris用先调好的
2.SDS低温容易析出
3.试剂纯度高的话，不用过滤。
如果你加入DTT或者巯基乙醇的话，建议分装到1.5的Ep管中，于-20冰箱长期保存。

ok
thanks
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8楼2012-12-13 13:07:55
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