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baobao包包

金虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白电泳时loading buffer的配制

最近配制蛋白电泳的loading buffer,遇到了几个问题,还请前辈们指教:
1、pH是配制Tris 的时候调节还是最后再调节?
2、SDS溶解之后很容易凝,为什么?
3、所有样品加入后,为什么需要过滤?过滤掉什么?
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xhjggl

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币-10, 应助指数-2, 屏蔽内容, 违规存档, 毫无意义的垃圾广告 2012-12-11 09:00:28
本帖内容被屏蔽

2楼2012-12-10 20:50:00
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-12-11 09:01:30
1. 都可以,用先调好的会比较方便
2. 是指析出吗?可能是气温低的缘故,SDS在低温很容易析出
3. 如果用的试剂够好的话,不过滤也是没啥影响的,过滤可能是考虑到溴酚蓝、SDS之类的有不溶的物质,可能会影响电泳或者你蛋白样品的制作
3楼2012-12-10 21:04:25
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

没自己做过  我们一般都买
快乐奋斗,创造所有。
4楼2012-12-11 08:38:46
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没做过,但是常识性的调PH应该是在最后一步调吧。
正如别人所说的,买现成的,省时间,减少误差
5楼2012-12-11 08:56:13
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laoboshihou

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 都可以,用先调好的会比较方便
2. 是指析出吗?可能是气温低的缘故,SDS在低温很容易析出
3. 如果用的试剂够好的话,不过滤也是没啥影响的,过滤可能是考虑到溴酚蓝、SDS之类的有不溶的物质,可能会影响电泳或者你蛋白样品的制作
6楼2012-12-11 09:09:18
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.Tris用先调好的
2.SDS低温容易析出
3.试剂纯度高的话,不用过滤。
如果你加入DTT或者巯基乙醇的话,建议分装到1.5的Ep管中,于-20冰箱长期保存。
天道酬勤
7楼2012-12-12 15:52:43
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baobao包包

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wchuangqi at 2012-12-12 15:52:43
1.Tris用先调好的
2.SDS低温容易析出
3.试剂纯度高的话,不用过滤。
如果你加入DTT或者巯基乙醇的话,建议分装到1.5的Ep管中,于-20冰箱长期保存。

ok
thanks
8楼2012-12-13 13:07:55
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