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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE蛋白电泳同一蛋白不同loading buffer条带不一样
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tzaixmc

木虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白电泳同一蛋白不同loading buffer条带不一样 已有1人参与

如题，我跑SDS-PAGE时，一个蛋白样品用商品化的SDS-PAGE loading buffer，煮沸5min后电泳条带大小为50kD左右，但是同一蛋白样品用Native PAGE loading buffer（即pH6.8的Tris-HCl和甘油配置）跑SDS-PAGE时电泳条带在20KD左右，很纳闷为什么会出现这样的情况啊。高手出来解释解释吧，谢谢！
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1楼 2012-07-31 21:39:42
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能蛋白质没有完全变性。
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2楼2012-07-31 22:08:37
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请检查这个两个BUFFER的PH是否一致，然后提高变性时间到15分钟再看。
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3楼2012-07-31 22:22:55
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
native loading buffer可能是蛋白质形成4聚体造成的。
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4楼2012-08-01 03:34:11
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
native page和SDS page不一样吧,怎么能用native page的上样buffer跑SDS page呢？
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
5楼2012-08-01 09:23:05
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dabinyang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-02 15:27:40
楼主，native 的buffer里是不含dtt、sds或者巯基乙醇的，没有改变蛋白的构象，而sds-page里蛋白的构象经过变性已经是橄榄型的，跑出来当然不一样了。
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younevertry,youneverknow~
6楼2012-08-01 21:27:55
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tzaixmc

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dabinyang at 2012-08-01 21:27:55
楼主，native 的buffer里是不含dtt、sds或者巯基乙醇的，没有改变蛋白的构象，而sds-page里蛋白的构象经过变性已经是橄榄型的，跑出来当然不一样了。

但是缓冲液，胶里面有SDS啊.我只是不还原蛋白啊
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7楼2012-08-02 08:53:24
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speedgy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，你应该只把2-mercaptoethanol去掉就好了，不可以去掉sds
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8楼2015-07-03 15:28:18
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