| 查看: 4011 | 回复: 9 | ||||
[求助]
SDS-Page电泳没有条带，都是黑黑的一片，请教原因
|
排除是蛋白浓度过高的原因，我稀释后在跑胶后，就只剩下染料前端有条蓝色带，其他的带都没有。我的蛋白浓度在2g/L以内，上样10uL |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 | 专业相关 |
» 猜你喜欢
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
一个有机合成实验室都需要哪些设备？
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE电泳看不到条带是什么原因？
已经有6人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论
已经有17人回复
- 请教为啥SDS-PAGE电泳条带弥散？
已经有10人回复
- SDS-PAGE电泳下面那条带是怎么回事
已经有10人回复
- 关于SDS-PAGE电泳问题
已经有12人回复
- SDS-PAGE电泳遇到的问题
已经有26人回复
- SDS-PAGE电泳求助
已经有13人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳条带问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】【求解】SDS-PAGE电泳图 为何出现竖条带？
已经有4人回复
- 【求助/交流】请问：sds-page都用哪种类型的电泳仪？
已经有14人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
已经有38人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳时是先加电极缓冲液和还是先加样品？
已经有12人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳
已经有33人回复
2楼2012-05-05 15:53:17
hellolin
金虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1304.2
- 散金: 116
- 帖子: 186
- 在线: 77.2小时
- 虫号: 1399917
- 注册: 2011-09-13
- 专业: 昆虫学
3楼2012-05-05 21:27:51
4楼2012-05-05 21:49:37
5楼2012-05-08 19:53:33
zhixuec
木虫 (著名写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3328.2
- 散金: 601
- 红花: 6
- 帖子: 2564
- 在线: 191.4小时
- 虫号: 957824
- 注册: 2010-02-28
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
6楼2012-06-06 22:45:24
7楼2012-06-07 21:32:07
8楼2014-01-24 13:51:04
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
|
楼主应该是SDS-PAGE electrophoresis的蛋白质条带模糊、分辨不佳和条带扩散的现象，原因和解决方法如下： 凌波丽（2013年10月24日） 蛋白质条带模糊、分辨不佳和条带扩散可能有多种原因。 1.加样量过多，会引起蛋白质条带模糊、分辨不佳和条带扩散。为了提高分辨率，应该避免加样过多，小体积样品可给出窄带.加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15µL（即2-10µg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100µL。（楼主已经排除这条，所以这条不必理睬） 2.加样没有立即电泳会引起蛋白质条带模糊、分辨不佳和条带扩散。加热蛋白质样品变性需要沸水浴3-5分钟即可，加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。 3.电泳凝胶浓度选择不适当引起蛋白质条带模糊、分辨不佳和条带扩散。请根据厂商的说明书配制对应蛋白质相对分子量的适当浓度的电泳凝胶，使得蛋白质组分的以充分分离。 4.通常靠近前沿的电泳带分辨率不佳。应根据分子量与凝胶孔径的关系，灌制适当浓度的凝胶。 5.蛋白质样品被水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。 6.电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。 7.低于10Kd的蛋白质分子在SDS-PAGE electrophoresis不可能获得好的分辨率，此时要用Tricine胶。 8.缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。 |
9楼2014-07-04 00:37:35
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
仅供参考！10楼2014-07-04 00:40:52
50