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tzaixmc

木虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白电泳同一蛋白不同loading buffer条带不一样已有1人参与

如题,我跑SDS-PAGE时,一个蛋白样品用商品化的SDS-PAGE loading buffer,煮沸5min后电泳条带大小为50kD左右,但是同一蛋白样品用Native PAGE loading buffer(即pH6.8的Tris-HCl和甘油配置)跑SDS-PAGE时电泳条带在20KD左右,很纳闷为什么会出现这样的情况啊。高手出来解释解释吧,谢谢!
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mitocam

新虫 (正式写手)

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可能蛋白质没有完全变性。
2楼2012-07-31 22:08:37
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chenguestc

木虫 (职业作家)

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请检查这个两个BUFFER的PH是否一致,然后提高变性时间到15分钟再看。
3楼2012-07-31 22:22:55
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

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native loading buffer可能是蛋白质形成4聚体造成的。
4楼2012-08-01 03:34:11
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
native page和SDS page不一样吧,怎么能用native page的上样buffer跑SDS page呢?
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
5楼2012-08-01 09:23:05
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dabinyang

木虫 (小有名气)

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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-02 15:27:40
楼主,native 的buffer里是不含dtt、sds或者巯基乙醇的,没有改变蛋白的构象,而sds-page里蛋白的构象经过变性已经是橄榄型的,跑出来当然不一样了。
younevertry,youneverknow~
6楼2012-08-01 21:27:55
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tzaixmc

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dabinyang at 2012-08-01 21:27:55
楼主,native 的buffer里是不含dtt、sds或者巯基乙醇的,没有改变蛋白的构象,而sds-page里蛋白的构象经过变性已经是橄榄型的,跑出来当然不一样了。

但是缓冲液,胶里面有SDS啊.我只是不还原蛋白啊
7楼2012-08-02 08:53:24
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speedgy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主,你应该只把2-mercaptoethanol去掉就好了,不可以去掉sds
8楼2015-07-03 15:28:18
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