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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

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[交流] PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带

做完PCR后直接双酶切，然后跑电泳，但是看不到条带，这是什么原因啊？！是因为浓度不够？但是我PCR后跑电泳条带还是挺亮的

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1楼 2013-03-23 08:55:22

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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-23 16:36:13
酶切前没跑电泳了，点样也没问题，我想知道的是一般PCR产物直接酶切的话要多大的量比较合适啊...

把握比较大的时候可以不跑电泳。但一旦出问题你就找不到原因了。
所以实验还是做全套吧。PCR产物是回收后酶切还是直接在pcr反应液中酶切？回收后就几百到一千微克每20uL体系吧。

11楼2013-03-23 19:32:09

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XOooZzz

银虫 (小有名气)

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★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与

酶切前取少量pcr产物跑电泳了吗？酶切后点样时确实看着样液沉在胶孔里而不是飘出来了吗？无图无真相。

3楼2013-03-23 10:39:08

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天使托

专家顾问 (职业作家)

★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与

如果你PCR完后跑电泳很亮，直接双酶切怎么可能会没有条带？你该不会是点错了吧？双酶切后对条带大小也没有影响，repeat again

4楼2013-03-23 11:21:40

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zzzaazzzzz

新虫 (初入文坛)

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★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与

是一直都这样，还是就这次刚做出现的，重复一下，这样的结果是不对的

5楼2013-03-23 16:10:03

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