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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[交流] PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带

做完PCR后直接双酶切，然后跑电泳，但是看不到条带，这是什么原因啊？！是因为浓度不够？但是我PCR后跑电泳条带还是挺亮的
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1楼2013-03-23 08:55:22
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-03-23 16:36:13
酶切前没跑电泳了，点样也没问题，我想知道的是一般PCR产物直接酶切的话要多大的量比较合适啊...

把握比较大的时候可以不跑电泳。但一旦出问题你就找不到原因了。
所以实验还是做全套吧。PCR产物是回收后酶切还是直接在pcr反应液中酶切？回收后就几百到一千微克每20uL体系吧。
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11楼2013-03-23 19:32:09
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
酶切前取少量pcr产物跑电泳了吗？酶切后点样时确实看着样液沉在胶孔里而不是飘出来了吗？无图无真相。
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3楼2013-03-23 10:39:08
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
如果你PCR完后跑电泳很亮，直接双酶切怎么可能会没有条带？你该不会是点错了吧？双酶切后对条带大小也没有影响，repeat again
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4楼2013-03-23 11:21:40
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zzzaazzzzz

新虫 (初入文坛)
★
飘零的叶子(金币+1): 谢谢参与
是一直都这样，还是就这次刚做出现的，重复一下，这样的结果是不对的
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5楼2013-03-23 16:10:03
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