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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于pcr的问题，没条带？？？？？？
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ycycyc

新虫 (小有名气)

[求助] 关于pcr的问题，没条带？？？？？？

问一下，有没有实验高手，扩增长片段pcr的时候，之前用试剂盒提取的DNA
有产物，换做酚抽提法提取的dna做模版以后就没有产物了。是怎么回事呢？然后又用试剂盒提取的dna做模版，同样的条件，又没有产物了。
所以，弄不明白具体是什么问题。两次试剂盒提取的DNA，用琼脂糖凝胶电泳检测，发现第一次条带较暗，第二次很亮。
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1楼 2013-05-30 14:53:21
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ycycyc(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-30 18:51:42
是不是第二次虽然提的浓度较高，但是纯度不够？酚之类的没有除去干净影响PCR效果、
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

ycycyc
2楼2013-05-30 15:45:20
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匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见
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3楼2013-05-30 19:30:21
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ycycyc

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-05-30 15:45:20
是不是第二次虽然提的浓度较高，但是纯度不够？酚之类的没有除去干净影响PCR效果、

dna用nano测了浓度和od值，貌似还可以。现在也不确定，有可能酶出了问题。
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4楼2013-05-30 21:56:30
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ycycyc: 金币+4, 听了你的建议，有效果，谢谢。 2013-06-02 15:47:45
如果不是实际问题，八成是浓度问题，一般10ul体系推荐DNA量为20ng，楼主换算一下看看，如果大于100效果就不太好！
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5楼2013-06-01 09:02:05
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ycycyc

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 世外清风 at 2013-06-01 09:02:05
如果不是实际问题，八成是浓度问题，一般10ul体系推荐DNA量为20ng，楼主换算一下看看，如果大于100效果就不太好！

谢谢哦，最近一直没进展呢，你的建议很好，我试一下。请问你是搞遗传分子这块的吗？
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6楼2013-06-01 17:32:09
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用过氛，你的那个估计是过期了啊，你是不是吸到上层的油了啊
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7楼2013-06-01 20:51:07
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ycycyc at 2013-06-01 17:32:09
谢谢哦，最近一直没进展呢，你的建议很好，我试一下。请问你是搞遗传分子这块的吗？...

是的
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8楼2013-06-01 21:08:14
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nishg

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by taojun at 2013-06-01 20:51:07
我用过氛，你的那个估计是过期了啊，你是不是吸到上层的油了啊

上层是油吗？？？
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9楼2013-06-02 08:37:14
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杀虫者

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
求双酶切最佳条件和试剂用量
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10楼2013-06-02 09:51:11
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