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ycycyc

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[求助] 关于pcr的问题，没条带？？？？？？

问一下，有没有实验高手，扩增长片段pcr的时候，之前用试剂盒提取的DNA
有产物，换做酚抽提法提取的dna做模版以后就没有产物了。是怎么回事呢？然后又用试剂盒提取的dna做模版，同样的条件，又没有产物了。
所以，弄不明白具体是什么问题。两次试剂盒提取的DNA，用琼脂糖凝胶电泳检测，发现第一次条带较暗，第二次很亮。

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1楼 2013-05-30 14:53:21

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ycycyc

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-05-30 15:45:20
是不是第二次虽然提的浓度较高，但是纯度不够？酚之类的没有除去干净影响PCR效果、

dna用nano测了浓度和od值，貌似还可以。现在也不确定，有可能酶出了问题。

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4楼2013-05-30 21:56:30

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德国工兵铲

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【答案】应助回帖

★
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ycycyc(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-30 18:51:42

是不是第二次虽然提的浓度较高，但是纯度不够？酚之类的没有除去干净影响PCR效果、

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ycycyc

2楼2013-05-30 15:45:20

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3楼2013-05-30 19:30:21

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【答案】应助回帖

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ycycyc: 金币+4, 听了你的建议，有效果，谢谢。 2013-06-02 15:47:45

如果不是实际问题，八成是浓度问题，一般10ul体系推荐DNA量为20ng，楼主换算一下看看，如果大于100效果就不太好！

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5楼2013-06-01 09:02:05

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