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liuxing1-1至尊木虫 (知名作家)
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崩溃ing---PCR后无条带问题
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本人打算做T-RFLP,现在正在做土壤总细菌16S PCR,引物是27F和1492R,PCR体系(25ul)是:dNTP(10UM) 0.5ul, 引物(10UM)各1uL,Taq E 0.5ul,10×buffer缓冲液(5U/uL),模板0.5uL,以水补齐。PCR条件是94℃预变性5 min,94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸1.5 min,35个循环,72℃下延伸10min。按照这个条件,无法P出条带。期间,也换过EB染色液、TAE,但问题依旧。大家帮忙分析一下是什么原因吧。 还有,用先前提取的大田土壤DNA可以P出来,但是用我前两天刚刚提取的室内土样DNA竟然无法P出。下面个给出两种DNA的具体参数: 土样 浓度 260 280 260/280 260/230 PCR情况 大田 65.4 1.307 0.757 1.73 0.89 可以P出 室内 59.6 1.192 0.680 1.75 0.25 无法P出 室内 60.9 1.218 0.711 1.71 1.16 无法P出 请大家帮忙看看,这是怎么回事啊 ? |
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