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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 崩溃ing---PCR后无条带问题
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lxw1990
11楼2012-05-12 11:27:44
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elbo

金虫 (小有名气)
找到志同道合的了，我也在做TRFLP。首先一般情况下DNA都需要纯化。反应体系配置过程一定要仔细，建议加大模板量。 PCR条件自己摸索还是拿的别人，另外 建议循环数减少到25,（据研究报道，减少循环数能够减少碱基错配）
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12楼2012-05-12 11:29:50
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liuxing1-1

至尊木虫 (知名作家)
西瓜: 回帖置顶 2012-05-12 23:34:54
引用回帖:
12楼: Originally posted by elbo at 2012-05-12 11:29:50:
找到志同道合的了，我也在做TRFLP。首先一般情况下DNA都需要纯化。反应体系配置过程一定要仔细，建议加大模板量。 PCR条件自己摸索还是拿的别人，另外 建议循环数减少到25,（据研究报道，减少循环数能够减少碱基错 ...

谢谢你的建议，这两天开始做出来了，很惊喜
加大模板量不一定行，我试过了
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13楼2012-05-12 12:57:37
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liuxing1-1 at 2012-05-12 12:57:37:
谢谢你的建议，这两天开始做出来了，很惊喜
加大模板量不一定行，我试过了

传授一下你的经验呗，怎么搞定的，
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14楼2012-05-12 19:34:56
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bluysky0902

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liuxing1-1 at 2012-05-12 12:57:37:
谢谢你的建议，这两天开始做出来了，很惊喜
加大模板量不一定行，我试过了

请问楼主 怎么处理的？
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15楼2012-05-12 22:51:45
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liuxing1-1

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
14楼: Originally posted by elbo at 2012-05-12 19:34:56:
传授一下你的经验呗，怎么搞定的，

其实，我就是做了两套体系，体系2 的DNA浓度加倍而已，这样的情况下，大部分体系1 就能做出来，但是很少情况下，正好体系1 没做出来，但是体系2 竟然出条带了，所以，就这么配合着，都出来了
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16楼2012-05-13 10:23:30
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豆花加点糖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yanhua_2006 at 2012-05-11 19:51:27
我以前也出现过类似的问题，后来干脆直接整成50微升的体系，这样就好了。因为有些PCR管子的质量不是很好，会使酶液挂壁，影响PCR结果，总是P不出条带，后来我最近用的管子比较好，15微升都能P出来。还有一种方法，就 ...

请问在体系中加BSA是为什么？
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17楼2014-03-25 14:59:30
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