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liuxing1-1至尊木虫 (知名作家)
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崩溃ing---PCR后无条带问题
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本人打算做T-RFLP，现在正在做土壤总细菌16S PCR，引物是27F和1492R，PCR体系（25ul）是：dNTP（10UM） 0.5ul, 引物（10UM）各1uL，Taq E 0.5ul，10×buffer缓冲液（5U/uL），模板0.5uL，以水补齐。PCR条件是94℃预变性5 min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1.5 min，35个循环，72℃下延伸10min。按照这个条件，无法P出条带。期间，也换过EB染色液、TAE，但问题依旧。大家帮忙分析一下是什么原因吧。 还有，用先前提取的大田土壤DNA可以P出来，但是用我前两天刚刚提取的室内土样DNA竟然无法P出。下面个给出两种DNA的具体参数： 土样 浓度 260 280 260/280 260/230 PCR情况 大田 65.4 1.307 0.757 1.73 0.89 可以P出 室内 59.6 1.192 0.680 1.75 0.25 无法P出 室内 60.9 1.218 0.711 1.71 1.16 无法P出 请大家帮忙看看，这是怎么回事啊 ？ |
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