24小时热门版块排行榜    

查看: 1121  |  回复: 4

shadowerhua

新虫 (初入文坛)

[交流] 紧急求助 关于 PCR 无条带的问题,要奔溃啦 (请帮忙谢谢) 已有2人参与

PCR 产物 电泳一直没有结果,没有特异性条带
可是 real time PCR (加了SYBR) melting curve 都是有很强的 单一峰值。理论上应该有特异性产物在电泳中, marker 很清晰的,换了几种 loading也一样的结果。 1% 的 琼脂糖胶,
电泳中是同一个样品做了一些稀释,50x,500X, 5000X 和10000x, DNA template 是来自于 T4 ligation的 酶切产物,所以模板理论上应该是 环状双链DNA,  引物是 合作者 设计的, 肯定没有问题,都发了CNS 了


具体见 图片。

Untitled.jpg



2013-01-28 19.24.51.jpg

[ Last edited by shadowerhua on 2013-1-29 at 15:54 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的目标片段大约是多少?是否可以考虑加些DMSO减少高GC的影响
shine
2楼2013-01-29 16:10:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoulubin

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么不拿Q-PCR的产物跑个电泳呢?
说不定是你普通PCR反应条件不适合,还有就是注意产物大小。
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
3楼2013-01-30 10:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shadowerhua

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-29 16:10:00
你的目标片段大约是多少?是否可以考虑加些DMSO减少高GC的影响

目的片段大小是不知道的,以为做的是 inverse PCR, 检查 mutation 的插入点的,
所以 删选出来的colony 提了g DNA, 然后酶切,然后T4 链接,所以DNA 模板是一些 环状 双联DNA, 然后 用一对 primer ( mutation vector ) 去PCR, 然后sequence。
4楼2013-01-30 13:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shadowerhua

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-01-30 10:49:57
为什么不拿Q-PCR的产物跑个电泳呢?
说不定是你普通PCR反应条件不适合,还有就是注意产物大小。

主要的目的就是得到一个未知大小的产物,然后去 seq ,最后再去map 处 vector 以外的 序列来自于哪个位置基因
5楼2013-01-30 13:21:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shadowerhua 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +4 Tide man 2026-08-04 7/350 2026-08-04 11:23 by Tide man
[基金申请] 娱乐 +3 Tide man 2026-08-03 3/150 2026-08-04 09:58 by gltch
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备? 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
信息提示
请填处理意见