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汕头大学海洋科学接受调剂
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我和我自己

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR和回收条带的问题

从cDNA里扩一个150b的片段,用聚丙烯电泳出了在150b左右的三条带,条带深浅基本一致,这三条带相差大概二三十b。现在有两个想法,不知道哪个好些
1跑高浓度的琼脂糖,分出这三条带,切胶测序
2跑聚丙烯酰胺,切条带回收,再PCR,分别测序
如果第一种的话,跑多少浓度的?
第二种的话,如何回收聚丙烯酰胺的条带啊,煮沸法没有回收成功啊。
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bear0329

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 不错啊 2011-08-01 20:32:45
高浓度琼脂糖操作上不好弄,浓度高了后胶做不好,容易有气泡。
聚丙烯酰胺凝胶回收靠谱点,你看看相关的回收试剂盒,也不是很贵
以马内利!
2楼2011-08-01 18:07:23
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hc1027

木虫 (正式写手)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-02 09:58:24
引用回帖:
2楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-01 18:07:23:
高浓度琼脂糖操作上不好弄,浓度高了后胶做不好,容易有气泡。
聚丙烯酰胺凝胶回收靠谱点,你看看相关的回收试剂盒,也不是很贵

我以前看到别人论文中DGGE胶直接切下来溶解后,直接吸取上清液做PCR的,这样也可以,根本没用到回收试剂盒?
3楼2011-08-02 09:28:24
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我和我自己

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hc1027 at 2011-08-02 09:28:24:
我以前看到别人论文中DGGE胶直接切下来溶解后,直接吸取上清液做PCR的,这样也可以,根本没用到回收试剂盒?

这个溶解的时候胶吸水胀大了……,没有上清液了……加多点水做pcr就没条带了
4楼2011-09-02 12:51:39
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xiaojo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
849109楼: Originally posted by hc1027 at 2011-08-02 09:28:24
我以前看到别人论文中DGGE胶直接切下来溶解后,直接吸取上清液做PCR的,这样也可以,根本没用到回收试剂盒?...

我现在也是这样的情况,水加的少,胶就胀开了,加多了又怕稀释。你的问题解决了没啊?可不可以分享下啊?
5楼2012-08-19 10:03:21
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做的是200多bp的,用的琼脂糖凝胶电泳,浓度时3%。然后胶回收,结果还可以。希望对你有帮助
6楼2012-08-19 10:23:35
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