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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

[求助] PCR产物胶回收试剂盒已有1人参与

最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,加A,用于下一步和T载体连接,
加A之后跑了下电泳,上样量5微,结果效果就成这么暗了,用的是上海捷瑞的胶回收试剂盒,
搞了11个片段,第三遍了~,前两次都回收不到,试剂盒换的是新的一套,结果还是这么惨,
求各位大神帮分析下,或者提供下自己用的比较好的试剂盒(最小片段2.6K,3个3.5K,剩余基本都是5K左右)


PCR产物胶回收试剂盒
PCR产物.jpg


PCR产物胶回收试剂盒-1
加A后回收.jpg
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:58
dllchina: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2014-03-17 19:26:03
的确很低,浓度你再测一下,看看连载体是否达到要求。我们实验室用的试剂盒是天根产的效果还可以。
hehe
2楼2014-03-17 07:53:58
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,可以估量。
加A之后不用回收,直接估量就行,然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min,你看看温度你设置的对不对?
3楼2014-03-17 17:01:40
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 17:01:40
最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,可以估量。
加A之后不用回收,直接估量就行,然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min,你看看温度你设置的对不对?

是这个温度,酶还是用的新的
4楼2014-03-17 19:25:20
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 19:25:20
是这个温度,酶还是用的新的...

那你回收之后带亮不亮?   加A之后可以不回收,直接做转化。
5楼2014-03-17 20:12:31
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 20:12:31
那你回收之后带亮不亮?   加A之后可以不回收,直接做转化。...

回收之后不亮,就是图2那种暗暗的,所以想着换试剂盒
6楼2014-03-17 20:15:03
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 20:15:03
回收之后不亮,就是图2那种暗暗的,所以想着换试剂盒...

你回收的时候,胶要多溶一会,过柱子过3-4次,这样可以稍多一些。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2014-03-17 20:16:29
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 20:16:29
你回收的时候,胶要多溶一会,过柱子过3-4次,这样可以稍多一些。...

恩,下次应助回帖吧,我好给你金币,准备换个厂家的试剂盒,捷瑞的有点挫~
8楼2014-03-17 23:13:00
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 23:13:00
恩,下次应助回帖吧,我好给你金币,准备换个厂家的试剂盒,捷瑞的有点挫~...

好的。能对你有帮助就行。
9楼2014-03-18 10:39:08
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