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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物胶回收试剂盒
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

[求助] PCR产物胶回收试剂盒 已有1人参与

最近在克隆片段，5K左右，PCR上样20微，条带挺亮的了
回收后，加A，用于下一步和T载体连接，
加A之后跑了下电泳，上样量5微，结果效果就成这么暗了，用的是上海捷瑞的胶回收试剂盒，
搞了11个片段，第三遍了~，前两次都回收不到，试剂盒换的是新的一套，结果还是这么惨，
求各位大神帮分析下，或者提供下自己用的比较好的试剂盒（最小片段2.6K，3个3.5K，剩余基本都是5K左右）

PCR产物胶回收试剂盒
PCR产物.jpg


PCR产物胶回收试剂盒-1
加A后回收.jpg
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1楼 2014-03-16 21:53:20
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 20:15:03
回收之后不亮，就是图2那种暗暗的，所以想着换试剂盒...

你回收的时候，胶要多溶一会，过柱子过3-4次，这样可以稍多一些。
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dllchina
7楼2014-03-17 20:16:29
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:58
dllchina: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2014-03-17 19:26:03
的确很低，浓度你再测一下，看看连载体是否达到要求。我们实验室用的试剂盒是天根产的效果还可以。
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hehe
2楼2014-03-17 07:53:58
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
最近在克隆片段，5K左右，PCR上样20微，条带挺亮的了
回收后，可以估量。
加A之后不用回收，直接估量就行，然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min，你看看温度你设置的对不对？
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3楼2014-03-17 17:01:40
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 17:01:40
最近在克隆片段，5K左右，PCR上样20微，条带挺亮的了
回收后，可以估量。
加A之后不用回收，直接估量就行，然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min，你看看温度你设置的对不对？

是这个温度，酶还是用的新的
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4楼2014-03-17 19:25:20
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