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bob1987

铁虫 (初入文坛)

[求助] QPCR产物跑胶问题 已有2人参与

大家好,
    大家好,我最近在做QPCR,但是结果很奇怪,我的溶解曲线很好,Ct值也还好,但是QPCR 产物跑胶却啥也没有,不知道为什么?请大家帮帮我吧。我快急死了!

这是溶解曲线:
QPCR产物跑胶问题
N a Melt Curve.jpg


QPCR产物跑胶问题-1
2013.8.8 QPCR Na.jpg
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yhbletter

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 18:25:00
1,有没有跑内参的电泳图。
2,marker的条带大小,及电泳顺序说明
如果跑了内参,电泳依然是这样,建议将PCR试剂全部换掉,重新做PCR或qPCR。
2楼2013-08-09 13:30:34
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记忆的碎片

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 18:25:09
可能是配制的PCR体系有问题。曾出现过体系中没加Taq聚合酶,跑胶的结果和这一样,也是什么都看不到,重新配制这一体系后,重做,就有结果了。
3楼2013-08-09 20:29:30
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能你的这个溶解曲线是引物二聚体
4楼2013-08-10 20:47:09
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bob1987

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-08-10 20:47:09
可能你的这个溶解曲线是引物二聚体

我以前也做出来过,Tm值就是在83℃左右呀。为神魔现在做不出来了呢?
5楼2013-08-11 15:21:30
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六妖妖

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

直接加loading buffer点样跑胶,不需要再染色
6楼2013-10-22 16:06:24
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asr

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

Marker是多大的?
也可能目的片段太小,跑到胶外面了
思想极度邪恶,勿怕勿怪!\(^o^)/~
7楼2013-10-31 13:00:41
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口水牛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

qPCR最后一步是做溶解曲线,而后温度接着降下来,可能是这个复性的过程太快,PCR产物杂交导致的。同样的条件,用普通PCR仪试一遍吧。
8楼2014-07-29 20:42:07
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口水牛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

溶解曲线看的Tm值不是引物的,而是PCR产物的。83度的Tm值根本不可能是引物二聚体的。
9楼2014-07-29 20:46:15
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

用产物跑加燃料跑就好了,现在跑出来了么? 内参的产物也跑了没啊,若是内参跑不出来,要么是你cDNA有问题,要么就是你的胶和染料有问题。!祝顺利!
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
10楼2014-07-30 12:26:32
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