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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » QPCR产物跑胶问题
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bob1987

铁虫 (初入文坛)

[求助] QPCR产物跑胶问题 已有2人参与

大家好，
    大家好，我最近在做QPCR,但是结果很奇怪，我的溶解曲线很好，Ct值也还好，但是QPCR 产物跑胶却啥也没有，不知道为什么？请大家帮帮我吧。我快急死了！

这是溶解曲线：
QPCR产物跑胶问题
N a Melt Curve.jpg


QPCR产物跑胶问题-1
2013.8.8 QPCR Na.jpg
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1楼 2013-08-09 09:51:29
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yhbletter

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 18:25:00
1，有没有跑内参的电泳图。
2，marker的条带大小，及电泳顺序说明
如果跑了内参，电泳依然是这样，建议将PCR试剂全部换掉，重新做PCR或qPCR。
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2楼2013-08-09 13:30:34
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记忆的碎片

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 18:25:09
可能是配制的PCR体系有问题。曾出现过体系中没加Taq聚合酶，跑胶的结果和这一样，也是什么都看不到，重新配制这一体系后，重做，就有结果了。
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3楼2013-08-09 20:29:30
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能你的这个溶解曲线是引物二聚体
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4楼2013-08-10 20:47:09
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bob1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-08-10 20:47:09
可能你的这个溶解曲线是引物二聚体

我以前也做出来过，Tm值就是在83℃左右呀。为神魔现在做不出来了呢？
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5楼2013-08-11 15:21:30
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六妖妖

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

直接加loading buffer点样跑胶，不需要再染色
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6楼2013-10-22 16:06:24
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asr

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

Marker是多大的？
也可能目的片段太小，跑到胶外面了
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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
7楼2013-10-31 13:00:41
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口水牛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

qPCR最后一步是做溶解曲线，而后温度接着降下来，可能是这个复性的过程太快，PCR产物杂交导致的。同样的条件，用普通PCR仪试一遍吧。
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8楼2014-07-29 20:42:07
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口水牛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

溶解曲线看的Tm值不是引物的，而是PCR产物的。83度的Tm值根本不可能是引物二聚体的。
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9楼2014-07-29 20:46:15
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

用产物跑加燃料跑就好了，现在跑出来了么？ 内参的产物也跑了没啊，若是内参跑不出来，要么是你cDNA有问题，要么就是你的胶和染料有问题。！祝顺利！
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
10楼2014-07-30 12:26:32
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