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allegro1741

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[交流] Q-PCR的CT值是在30之前可靠么？

我做一个基因的定量Q-PCR，结果两次增加的程度不一样，头一次经过10倍稀释的CT值超过了30，第二次没有稀释CT值低于30，导师说第一次的超过30了就不可靠，不知道大家是不是以此作为一种标准来判断自己的实验结果的。

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1楼 2012-08-07 15:59:56

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回帖置顶 ( 共有3个 )

shenye.judy

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★
allegro1741(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-09 14:22:44

扩增次数越多，越有可能有非特异性产物。所以我们常规的PCR都是30个。q-PCR，本身就对引物的设计要求较高，并且为了更宽范围的定量，就放到40个。
如果你确定你的产物没有非特异性扩增（主要看溶解曲线或者跑胶结果），那么40个也是准的。
有不少taqman方法的文献，最后数据分析的时候用的是35个循环之前的数据，虽然实验的时候都做40个。

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2楼2012-08-07 16:13:43

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allegro1741

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-08-07 16:13:43
扩增次数越多，越有可能有非特异性产物。所以我们常规的PCR都是30个。q-PCR，本身就对引物的设计要求较高，并且为了更宽范围的定量，就放到40个。
如果你确定你的产物没有非特异性扩增（主要看溶解曲线或者跑胶结果 ...

那两次实验的结果差异太大了，一次增加6倍多，一次只增加了两倍多，增加的样品也不是同一个（前者是处理后48h的，后者是处理后24h的），以CT为30为标准来选择某个数据也并不准确啦？

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3楼2012-08-07 18:52:58

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