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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IQ5 RT-QPCR问题求助
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jingdanlong

新虫 (初入文坛)

[求助] IQ5 RT-QPCR问题求助

我用IQ5做了几次荧光定量-pcr预实验，但是结果总是显示基因的表达量一样。是不是我的plate设置有问题？还有就是为什么基因表达显示会一样呢，情动这块的同学们帮忙解答一下。

板面设置，绿色为ACTIN，蓝色为目的基因






actin 溶解曲线



目的基因-溶解曲线



基因输出结果
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1楼 2012-04-23 18:35:01
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！ 2012-04-23 22:24:16
楼主应该注意到面板上标示圆形的孔为做引物标曲用的。方形的孔代表做实验组的样品。楼主既做标曲又做实验组基因表达，不知这样设置对不对，反正我是没这样搞过？若是可以，还请高手指教
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2楼2012-04-23 20:10:12
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jingdanlong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-23 20:10:12:
楼主应该注意到面板上标示圆形的孔为做引物标曲用的。方形的孔代表做实验组的样品。楼主既做标曲又做实验组基因表达，不知这样设置对不对，反正我是没这样搞过？若是可以，还请高手指教

那应该怎么标示呢，我设计的第一个sybr1是ACTIN的标准曲线和不同部位的ACTIN，而后面的sybr2是目的基因的标准曲线和不同部位的目的基因。
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3楼2012-04-23 21:08:37
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 应助指数+1, 专家考核, 呵呵，孙版主用过不少机器嘛 2012-04-23 22:24:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by jingdanlong at 2012-04-23 21:08:37:
那应该怎么标示呢，我设计的第一个sybr1是ACTIN的标准曲线和不同部位的ACTIN，而后面的sybr2是目的基因的标准曲线和不同部位的目的基因。

你应该统一选啊，比如你做标曲，就选择stand按钮，也就是圆的。你做相对表达量，就选X，即方的按钮。不能方的圆的一起选啊
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jingdanlong
4楼2012-04-23 21:37:56
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jingdanlong

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-23 21:37:56:
你应该统一选啊，比如你做标曲，就选择stand按钮，也就是圆的。你做相对表达量，就选X，即方的按钮。不能方的圆的一起选啊

好的，其实我这样试过了，但结果还是一样的。谢谢你啊！
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5楼2012-04-24 15:55:04
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Jane_618

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-28 08:32:46
最近我也在用这个。疑惑lz为什么使用SYBR1和SYBR2两种染料。。。另外，我们都是得到Ct值之后自己计算相对表达量的。。。。
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6楼2012-04-27 18:26:55
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jingdanlong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Jane_618 at 2012-04-27 18:26:55:
最近我也在用这个。疑惑lz为什么使用SYBR1和SYBR2两种染料。。。另外，我们都是得到Ct值之后自己计算相对表达量的。。。。

恩，你们也是用的iq5吗？
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7楼2012-05-05 22:52:06
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jingdanlong

新虫 (初入文坛)
8楼2012-05-05 22:52:20
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Jane_618

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Jane_618 at 2012-04-27 18:26:55:
最近我也在用这个。疑惑lz为什么使用SYBR1和SYBR2两种染料。。。另外，我们都是得到Ct值之后自己计算相对表达量的。。。。

嗯 是iQ5
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9楼2012-05-06 09:06:26
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