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allegro1741

新虫 (小有名气)


[交流] Q-PCR的CT值是在30之前可靠么?

我做一个基因的定量Q-PCR,结果两次增加的程度不一样,头一次经过10倍稀释的CT值超过了30,第二次没有稀释CT值低于30,导师说第一次的超过30了就不可靠,不知道大家是不是以此作为一种标准来判断自己的实验结果的。
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shenye.judy

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
allegro1741(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-09 14:22:44
扩增次数越多,越有可能有非特异性产物。所以我们常规的PCR都是30个。q-PCR,本身就对引物的设计要求较高,并且为了更宽范围的定量,就放到40个。
如果你确定你的产物没有非特异性扩增(主要看溶解曲线或者跑胶结果),那么40个也是准的。
有不少taqman方法的文献,最后数据分析的时候用的是35个循环之前的数据,虽然实验的时候都做40个。
2楼2012-08-07 16:13:43
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allegro1741

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-08-07 16:13:43
扩增次数越多,越有可能有非特异性产物。所以我们常规的PCR都是30个。q-PCR,本身就对引物的设计要求较高,并且为了更宽范围的定量,就放到40个。
如果你确定你的产物没有非特异性扩增(主要看溶解曲线或者跑胶结果 ...

那两次实验的结果差异太大了,一次增加6倍多,一次只增加了两倍多,增加的样品也不是同一个(前者是处理后48h的,后者是处理后24h的),以CT为30为标准来选择某个数据也并不准确啦?
3楼2012-08-07 18:52:58
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shenye.judy

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
allegro1741: 金币+3 2012-08-09 17:40:08
呵呵,不打明白你的研究内容,你也没介绍清楚。我讲的只是大致原理。qPCR也算是各种期刊愿意接受的数据,所以只要你按照qPCR MIQC来做,是没有问题的。
4楼2012-08-09 12:46:26
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wanle159

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-08-09 12:46:26
呵呵,不打明白你的研究内容,你也没介绍清楚。我讲的只是大致原理。qPCR也算是各种期刊愿意接受的数据,所以只要你按照qPCR MIQC来做,是没有问题的。

请问下,什么是qPCR MIQC?
6楼2014-08-19 19:35:39
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bwangel

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在考虑到一系列可能出现的误差的情况下,30以前的我们考虑,30以后的怀疑可能会不准,
7楼2014-08-20 06:56:17
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简单回复
2012-08-09 14:32   回复  
allegro1741(金币+1): 谢谢参与
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