应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-qPCR实验问题
241/3返回列表123下一页
查看: 2989  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] RT-qPCR实验问题

大家好！我想问一下各位在做RT-qPCR的时候，用SYBR Green I荧光染色法，大家采用的定量的方法是什么？？？要是做标准曲线的话，各位的标准品是怎么制备的，是购买的呢，还是自己克隆的？？由于是第一次做，很多不是太明白？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学资料

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-04 10:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

和一

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要做什么啊？单纯的定量吗？标准品有商业化的，也可以使用已知浓度的质粒。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-04 11:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 和一 at 2012-07-04 11:08:03
你要做什么啊？单纯的定量吗？标准品有商业化的，也可以使用已知浓度的质粒。

我做的是SOD基因含量在用药前后的变化情况。那个质粒是不是要自己构建并且要含有自己的目的基因呢？？？
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-04 12:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-04 13:54:23
一般是采用相对定量的方法的，如果用绝对定量的方法的话就必须先制备标准品，一般看这个基因常不常见，常见的话说不定会有商品化的质粒购买，否则就必须自己做克隆了
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
4楼2012-07-04 12:32:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by czcpudai at 2012-07-04 12:26:16
我做的是SOD基因含量在用药前后的变化情况。那个质粒是不是要自己构建并且要含有自己的目的基因呢？？？...

做基因的表达，用相对定量就行了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-04 12:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-04 12:32:49
一般是采用相对定量的方法的，如果用绝对定量的方法的话就必须先制备标准品，一般看这个基因常不常见，常见的话说不定会有商品化的质粒购买，否则就必须自己做克隆了

恩  好的，谢谢！我想问的是要是用相对定量方法的话一般使用的是2-delta-delta-Ct吗？用这种方法的时候怎么保证其扩增的效率是1或者是如何计算器扩增效率？？？
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-04 15:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jimjohntall at 2012-07-04 12:36:30
做基因的表达，用相对定量就行了。...

恩 谢谢！
回复此楼
7楼2012-07-04 15:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-09 13:48:07
引用回帖:
6楼: Originally posted by czcpudai at 2012-07-04 15:36:04
恩  好的，谢谢！我想问的是要是用相对定量方法的话一般使用的是2-delta-delta-Ct吗？用这种方法的时候怎么保证其扩增的效率是1或者是如何计算器扩增效率？？？...

用自己的反转录的模版，梯度稀释，做一个类似的标准曲线，来确证扩增效率，因为这个扩增效率也只是在一定的浓度范围内是1，但其实大部分的情况下我们反转录的模版的浓度时符合的。
一般采用的方法是2-delta-delta-Ct
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
8楼2012-07-04 16:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
恩，好的，非常感谢！！
回复此楼
9楼2012-07-04 16:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l_h_10

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-05 13:44:07
看你的扩增效率，2-delta-delta-Ct方法有使用的限制，只有在一定条件内才可以使用这个方法。你详细查一下。
如果不觉得浪费试剂的话，最好用双标准曲线法。
另外可以把PCR产物切胶回收，回收的DNA稀释后做标准曲线。
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-04 20:51:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 czcpudai 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭