应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-qPCR实验问题
51/1返回列表
查看: 3656  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] RT-qPCR实验问题

大家好！我想问一下各位在做RT-qPCR的时候，用SYBR Green I荧光染色法，大家采用的定量的方法是什么？？？要是做标准曲线的话，各位的标准品是怎么制备的，是购买的呢，还是自己克隆的？？由于是第一次做，很多不是太明白？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学资料

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-04 10:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-09 13:48:07
引用回帖:
6楼: Originally posted by czcpudai at 2012-07-04 15:36:04
恩  好的，谢谢！我想问的是要是用相对定量方法的话一般使用的是2-delta-delta-Ct吗？用这种方法的时候怎么保证其扩增的效率是1或者是如何计算器扩增效率？？？...

用自己的反转录的模版，梯度稀释，做一个类似的标准曲线，来确证扩增效率，因为这个扩增效率也只是在一定的浓度范围内是1，但其实大部分的情况下我们反转录的模版的浓度时符合的。
一般采用的方法是2-delta-delta-Ct
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
8楼2012-07-04 16:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

和一

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要做什么啊？单纯的定量吗？标准品有商业化的，也可以使用已知浓度的质粒。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-04 11:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 和一 at 2012-07-04 11:08:03
你要做什么啊？单纯的定量吗？标准品有商业化的，也可以使用已知浓度的质粒。

我做的是SOD基因含量在用药前后的变化情况。那个质粒是不是要自己构建并且要含有自己的目的基因呢？？？
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-04 12:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-04 13:54:23
一般是采用相对定量的方法的，如果用绝对定量的方法的话就必须先制备标准品，一般看这个基因常不常见，常见的话说不定会有商品化的质粒购买，否则就必须自己做克隆了
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
4楼2012-07-04 12:32:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 07:59 by gy1nBQXYQJqL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 07:55 by popo0625
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 07:46 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 07:32 by winsaint
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭