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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

好贴马克之~~~正解我所问
11楼2012-07-04 22:24:13
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wcg129

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

12楼2012-07-05 09:58:04
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-04 16:00:13
用自己的反转录的模版,梯度稀释,做一个类似的标准曲线,来确证扩增效率,因为这个扩增效率也只是在一定的浓度范围内是1,但其实大部分的情况下我们反转录的模版的浓度时符合的。
一般采用的方法是2-delta-delta ...

要是使用自己反转录的模板,需不需要知道模板的浓度??? 还是取一定量的模板,做梯度稀释,然后做标准曲线???
13楼2012-07-09 11:12:30
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

取一定量的模板,做梯度稀释,然后做标准曲线,这个标准曲线只是为了确保使你的模版浓度在这个浓度范围内,扩增效率是1左右,并不是用来定量的
风雪夜归人
14楼2012-07-09 12:54:05
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-09 12:54:05
取一定量的模板,做梯度稀释,然后做标准曲线,这个标准曲线只是为了确保使你的模版浓度在这个浓度范围内,扩增效率是1左右,并不是用来定量的

恩  明白了  多谢!
15楼2012-07-09 13:18:54
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by wqj1988926 at 2012-07-09 12:54:05
取一定量的模板,做梯度稀释,然后做标准曲线,这个标准曲线只是为了确保使你的模版浓度在这个浓度范围内,扩增效率是1左右,并不是用来定量的

您好,我还有一个问题想问一下您,就是关于实验对照问题。
对于阳性对照,指的是含目的基因模板的实验组吧?
阴性对照就是不含目的基因的模板的实验组吧? 这两个验证的目的是什么? 阴性对照验证体系有没有污染?阳性对照验证模板的质量,还是反应体系的准确性???
16楼2012-07-09 13:34:16
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

关于对照的问题,一般做的时候只做NTC,即以dd水代替模版,应该就是你说的阴性对照吧
风雪夜归人
17楼2012-07-09 15:36:40
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

当你对某个基因进行绝对定量的时候,需要做标准曲线;当做相对定量的时候,不需要做标准曲线。
18楼2012-07-09 22:29:01
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-07-09 22:29:01
当你对某个基因进行绝对定量的时候,需要做标准曲线;当做相对定量的时候,不需要做标准曲线。

恩  好的 谢谢了
19楼2012-07-10 12:48:49
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

求助,我想克隆一个新基因,这个基因在NCBI里面的序列有预测字样,我该怎么做,谢谢解惑。
20楼2012-07-10 14:47:40
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