应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物非特异性条带的去除
151/2返回列表12下一页
查看: 2369  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

王芳边疆

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物非特异性条带的去除

PCR产物出现少量的非特异性条带，该条带与特异性条带间隔很近，使用PCR产物纯化试剂盒好还是割胶回收试剂盒好呢？
由图可以看出，F200、H200在240bp处拥有浓度很大的特异性条带，然而在其上方微弱的看到些条带，由于PCR条件摸索多次不能成功，预采用PCR产物纯化试剂盒或者胶回收试剂盒，可是初来乍到，对方法的选取有些迷茫，请各位前辈给予帮助
PCR产物非特异性条带的去除
FGHK240bp PCR产物 2013-07-14 20 小时 29 分钟_副本.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
温暖定格
1楼 2013-07-14 20:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-07-14 21:45:08
非特异性扩增没办法避免，一般的方法就是胶回收，如果在体系里面做的话尽量保持酶量减少和引物优化吧。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-14 21:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 17:45:04
如果条带在胶上能分开就切胶回收。PCR回收试剂盒只是把DNA片段吸附洗脱，除去dNTP和盐。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-14 23:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王芳边疆

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-14 23:50:15
如果条带在胶上能分开就切胶回收。PCR回收试剂盒只是把DNA片段吸附洗脱，除去dNTP和盐。

我还想弱弱的问一句，F200和H200泳道的条带上方一点点白色的影子是胶跑出来的痕迹还是非特异性条带呢？
赞一下 回复此楼
温暖定格
4楼2013-07-15 10:19:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 王芳边疆 at 2013-07-15 10:19:42
我还想弱弱的问一句，F200和H200泳道的条带上方一点点白色的影子是胶跑出来的痕迹还是非特异性条带呢？...

光从这张图上有些不是很好判断。如果你的PCR条件已经优化过了，你试试切胶的时候尽量不要切到上面。
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-15 11:03:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 17:45:13
提高退火温度3-5度，应该可以避免非特异性条带。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-15 11:19:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的PCR条件发过来看看。
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-15 11:21:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王芳边疆 at 2013-07-15 10:19:42
我还想弱弱的问一句，F200和H200泳道的条带上方一点点白色的影子是胶跑出来的痕迹还是非特异性条带呢？...

这个不好说，但是你的目的条带绝对是大量的。先切胶回收了做连接，再pcr验证阳性克隆，再测序就行了！
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-15 12:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得这个不是非特异性条带，这个PCR结果挺漂亮的。不放心的话可以测序验证一下，看有没有套峰。
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-15 14:18:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maidi12

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
10楼2013-07-15 21:29:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王芳边疆 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭