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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物非特异性条带的去除
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王芳边疆

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物非特异性条带的去除

PCR产物出现少量的非特异性条带，该条带与特异性条带间隔很近，使用PCR产物纯化试剂盒好还是割胶回收试剂盒好呢？
由图可以看出，F200、H200在240bp处拥有浓度很大的特异性条带，然而在其上方微弱的看到些条带，由于PCR条件摸索多次不能成功，预采用PCR产物纯化试剂盒或者胶回收试剂盒，可是初来乍到，对方法的选取有些迷茫，请各位前辈给予帮助
PCR产物非特异性条带的去除
FGHK240bp PCR产物 2013-07-14 20 小时 29 分钟_副本.jpg
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温暖定格
1楼2013-07-14 20:56:34
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 17:45:13
提高退火温度3-5度，应该可以避免非特异性条带。
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6楼2013-07-15 11:19:46
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-07-14 21:45:08
非特异性扩增没办法避免，一般的方法就是胶回收，如果在体系里面做的话尽量保持酶量减少和引物优化吧。
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2楼2013-07-14 21:31:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 17:45:04
如果条带在胶上能分开就切胶回收。PCR回收试剂盒只是把DNA片段吸附洗脱，除去dNTP和盐。
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3楼2013-07-14 23:50:15
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王芳边疆

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-14 23:50:15
如果条带在胶上能分开就切胶回收。PCR回收试剂盒只是把DNA片段吸附洗脱，除去dNTP和盐。

我还想弱弱的问一句，F200和H200泳道的条带上方一点点白色的影子是胶跑出来的痕迹还是非特异性条带呢？
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温暖定格
4楼2013-07-15 10:19:42
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