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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR非特异性条带
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hsingyu

木虫 (正式写手)

[求助] PCR非特异性条带

RT-PCR之后凝胶电泳图上好多非特异性条带，问题是我用的同一批样品同样的条件去P的为什么有的就特异性非常好，有的却很差？引物有问题？
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做最好的自己~
1楼 2012-07-27 09:18:49
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回帖置顶 ( 共有3个 )

thunder00

木虫 (著名写手)

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hsingyu: 回帖置顶 2012-07-27 18:10:31
你的退火温度不够，建议优化PCR条件
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4楼2012-07-27 11:23:13
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liyanxiabd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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1949stone: 回帖置顶 2012-09-02 17:12:54
你换一对引物，看是否还出现同样的结果！体系、退火温度、引物不一样，扩展的结果就会不同
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6楼2012-07-27 13:07:33
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

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hsingyu: 回帖置顶 2012-07-28 10:17:47
引物不同就不好比较了。如果只是过程中杂带较大，可以提高退火温度、降低循环次数试试。此外，减少退火时间有时也可以考虑。
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8楼2012-07-28 09:06:19
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xw19880905

新虫 (小有名气)

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你用的引物是相同的吗？个人觉得应该是引物的问题
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2楼2012-07-27 10:37:45
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hsingyu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-07-27 10:37:45
你用的引物是相同的吗？个人觉得应该是引物的问题

同样的cDNA，不同的引物
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做最好的自己~
3楼2012-07-27 10:50:07
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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不同引物，特异性结合不同，建议进行温度梯度PCR
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5楼2012-07-27 11:55:22
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0008meng

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是引物发生二聚化
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7楼2012-07-27 13:11:56
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hsingyu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by joan198108 at 2012-07-28 09:06:19
引物不同就不好比较了。如果只是过程中杂带较大，可以提高退火温度、降低循环次数试试。此外，减少退火时间有时也可以考虑。

我已经比上一次PCR用的退火温度提高了几度还是没办法消除非特异性条带，减少退火时间有用吗？我退火设的是20s
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做最好的自己~
9楼2012-07-28 10:20:20
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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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1949stone: 同意 2012-09-02 17:13:12
引物二聚体很少有没有的，所以有二聚体也没关系，只要有目的条带就可以，至于非特异性条带，说明退火温度不是最适合的！
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
10楼2012-07-28 11:37:36
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