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hsingyu

木虫 (正式写手)

[求助] PCR非特异性条带

RT-PCR之后凝胶电泳图上好多非特异性条带,问题是我用的同一批样品同样的条件去P的为什么有的就特异性非常好,有的却很差?引物有问题?
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做最好的自己~
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hsingyu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by joan198108 at 2012-07-28 09:06:19
引物不同就不好比较了。如果只是过程中杂带较大,可以提高退火温度、降低循环次数试试。此外,减少退火时间有时也可以考虑。

我已经比上一次PCR用的退火温度提高了几度还是没办法消除非特异性条带,减少退火时间有用吗?我退火设的是20s
做最好的自己~
9楼2012-07-28 10:20:20
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的引物是相同的吗?个人觉得应该是引物的问题
2楼2012-07-27 10:37:45
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hsingyu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-07-27 10:37:45
你用的引物是相同的吗?个人觉得应该是引物的问题

同样的cDNA,不同的引物
做最好的自己~
3楼2012-07-27 10:50:07
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thunder00

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
hsingyu: 回帖置顶 2012-07-27 18:10:31
你的退火温度不够,建议优化PCR条件
4楼2012-07-27 11:23:13
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