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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR出现不能解释的条带
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waldenpond

金虫 (著名写手)

[求助] PCR出现不能解释的条带

我用细菌通用引物跑PCR，好几次都遇见这样的问题：
1.在目的条带上面或者下面出现其它条带，无法解释。
2.dd水（空白对照，PCR模板为dd水）电泳后也出现条带。
*PCR的引物和条件都是从一篇外文文章中参考来的，而且我们课题组之前也用这些引物和条件跑PCR，结果都可以。
*因为我做的是细菌，所以细菌污染特别容易，这也导致dd水组很容易污染，所以我用0.22um的滤过膜将dd水滤过除菌，但是空白对照组还是出现条带。我之前也怀疑实际污染，但是试剂公司讲他们已经对PCR试剂进行了无菌处理。
大家给分析一下是什么原因，怎样改进要好一些，谢谢！

（图片是截取的，不是很清楚，见谅哈！）

[ Last edited by waldenpond on 2012-7-3 at 13:01 ]
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1楼 2012-07-03 13:00:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by real-gold at 2012-07-03 20:09:37
娃哈哈纯净水用来做pcr？...

对！比实验室的超纯水还超纯！
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-07-03 21:03:51
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普通回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 呵呵，很多人HPLC都用哇哈哈跑的啊 2012-07-03 15:34:45
waldenpond: 金币+1, ★有帮助 2012-07-16 09:23:07
水污染问题给你一个窍门，很好用，娃哈哈纯净水绝对不会出现水污染的问题，当然其它试剂的污染就要靠你们自己去克服了，反正我们实验室都是用的娃哈哈纯净水，16s表明，很干净呐！
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-03 13:18:05
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-16 09:23:21
会不会试剂有污染，我以前做的时候，发现taq酶污染的，楼主看看是不是这个问题
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风雪夜归人
3楼2012-07-03 16:51:26
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雅典娜1008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有一种可能就是，会不会是电泳槽缓冲液长时间没换了？
PS：据说娃哈哈纯净水杭州产的最好啊~
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平静、淡然、感恩
4楼2012-07-03 17:08:38
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 13:18:05
水污染问题给你一个窍门，很好用，娃哈哈纯净水绝对不会出现水污染的问题，当然其它试剂的污染就要靠你们自己去克服了，反正我们实验室都是用的娃哈哈纯净水，16s表明，很干净呐！

娃哈哈纯净水用来做pcr？
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5楼2012-07-03 20:09:37
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kaikal

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我只能说你实验室的体系已经被污染了，一般来说试剂应该没什么问题的吧！
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加油！！！
7楼2012-07-06 09:36:11
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healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+3, ★有帮助 2012-07-06 13:37:47
本帖内容被屏蔽
8楼2012-07-06 12:23:38
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farawaylcr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-07 13:48:22
DDH2O能扩增，说明水有污染。
你的目标带上面分子量稍大的带是你的目标带高级结构，或者循环数太多，尤其是在最后几个循环里当PCR MIX里任何一种成分不足时，PCR就形成空转，因而你的PCR产物变性复性过程中，双链或许有少许几个碱基的滑动结合造成的。在SSR中经常出现这种情况。
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9楼2012-07-06 16:13:45
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qiuqu_200212

至尊木虫 (知名作家)

无助又无奈

【答案】应助回帖

所用的水可能有污染的迹象，与引物专一性是否有关
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无奈又无助的天鹅，孤零零
10楼2012-07-06 16:32:54
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