应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR出现不能解释的条带
181/2返回列表12下一页
查看: 3549  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

waldenpond

金虫 (著名写手)

[求助] PCR出现不能解释的条带

我用细菌通用引物跑PCR，好几次都遇见这样的问题：
1.在目的条带上面或者下面出现其它条带，无法解释。
2.dd水（空白对照，PCR模板为dd水）电泳后也出现条带。
*PCR的引物和条件都是从一篇外文文章中参考来的，而且我们课题组之前也用这些引物和条件跑PCR，结果都可以。
*因为我做的是细菌，所以细菌污染特别容易，这也导致dd水组很容易污染，所以我用0.22um的滤过膜将dd水滤过除菌，但是空白对照组还是出现条带。我之前也怀疑实际污染，但是试剂公司讲他们已经对PCR试剂进行了无菌处理。
大家给分析一下是什么原因，怎样改进要好一些，谢谢！

（图片是截取的，不是很清楚，见谅哈！）

[ Last edited by waldenpond on 2012-7-3 at 13:01 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-03 13:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by real-gold at 2012-07-03 20:09:37
娃哈哈纯净水用来做pcr？...

对！比实验室的超纯水还超纯！
赞一下(1人) 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-07-03 21:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 呵呵，很多人HPLC都用哇哈哈跑的啊 2012-07-03 15:34:45
waldenpond: 金币+1, ★有帮助 2012-07-16 09:23:07
水污染问题给你一个窍门，很好用，娃哈哈纯净水绝对不会出现水污染的问题，当然其它试剂的污染就要靠你们自己去克服了，反正我们实验室都是用的娃哈哈纯净水，16s表明，很干净呐！
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-03 13:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-16 09:23:21
会不会试剂有污染，我以前做的时候，发现taq酶污染的，楼主看看是不是这个问题
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
3楼2012-07-03 16:51:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雅典娜1008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有一种可能就是，会不会是电泳槽缓冲液长时间没换了？
PS：据说娃哈哈纯净水杭州产的最好啊~
赞一下 回复此楼
平静、淡然、感恩
4楼2012-07-03 17:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-07-03 13:18:05
水污染问题给你一个窍门，很好用，娃哈哈纯净水绝对不会出现水污染的问题，当然其它试剂的污染就要靠你们自己去克服了，反正我们实验室都是用的娃哈哈纯净水，16s表明，很干净呐！

娃哈哈纯净水用来做pcr？
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-03 20:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaikal

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我只能说你实验室的体系已经被污染了，一般来说试剂应该没什么问题的吧！
赞一下 回复此楼
加油！！！
7楼2012-07-06 09:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+3, ★有帮助 2012-07-06 13:37:47
本帖内容被屏蔽
8楼2012-07-06 12:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

farawaylcr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-07 13:48:22
DDH2O能扩增，说明水有污染。
你的目标带上面分子量稍大的带是你的目标带高级结构，或者循环数太多，尤其是在最后几个循环里当PCR MIX里任何一种成分不足时，PCR就形成空转，因而你的PCR产物变性复性过程中，双链或许有少许几个碱基的滑动结合造成的。在SSR中经常出现这种情况。
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-06 16:13:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiuqu_200212

至尊木虫 (知名作家)

无助又无奈

【答案】应助回帖

所用的水可能有污染的迹象，与引物专一性是否有关
赞一下 回复此楼
无奈又无助的天鹅，孤零零
10楼2012-07-06 16:32:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 waldenpond 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭