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wangdandelia木虫 (正式写手)
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【求助/交流】质粒片段丢失问题 已有6人参与
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各位虫友，我想请教一下，你们有没有遇到质粒转到感受态细胞后，会丢失片段的问题？ 我最近遇到了一个问题，就是将质粒切开，人工插入一个片段，再连接后，转化到感受态细胞中，结果得到的新的质粒丢失了一个很大的片段，不知道这是什么原因，欢迎各位虫友来讨论一下！我用的是一个含有转座子的自杀质粒，pRL27。但是在受体菌中是可以稳定存在的。 我查找资料，至今还没有找到相关的原因。可能是感受态细胞出了问题，现在正准备把原质粒的菌体通过没有抗性的LB培养基传代培养，从而筛选一个完全丢失质粒的受体菌，不知道这个方法可行不可行，需要注意什么问题。 我做个对照试验，就是把提好的质粒不任何处理，再次转入感受态细胞中，然后从转化子中提取质粒，突然发现质粒条带还有，但是质粒条带下方莫名其妙地多了一个条带，请问这怎么解释呢？是不是感受态细胞污染了呢？ [ Last edited by wangdandelia on 2010-12-19 at 11:10 ] |
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