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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒片段丢失问题
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒片段丢失问题 已有6人参与

各位虫友，我想请教一下，你们有没有遇到质粒转到感受态细胞后，会丢失片段的问题？
我最近遇到了一个问题，就是将质粒切开，人工插入一个片段，再连接后，转化到感受态细胞中，结果得到的新的质粒丢失了一个很大的片段，不知道这是什么原因，欢迎各位虫友来讨论一下！我用的是一个含有转座子的自杀质粒，pRL27。但是在受体菌中是可以稳定存在的。
我查找资料，至今还没有找到相关的原因。可能是感受态细胞出了问题，现在正准备把原质粒的菌体通过没有抗性的LB培养基传代培养，从而筛选一个完全丢失质粒的受体菌，不知道这个方法可行不可行，需要注意什么问题。



我做个对照试验，就是把提好的质粒不任何处理，再次转入感受态细胞中，然后从转化子中提取质粒，突然发现质粒条带还有，但是质粒条带下方莫名其妙地多了一个条带，请问这怎么解释呢？是不是感受态细胞污染了呢？

[ Last edited by wangdandelia on 2010-12-19 at 11:10 ]
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1楼 2010-12-13 09:50:44
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gundamba

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我出过这样的问题！！！后来也在小木虫上问，没得到合理的解答，后来我大批量的筛，筛出来了，但是这种情况还是有！
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2楼2010-12-14 23:04:45
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adslye

银虫 (正式写手)
★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-23 09:19:51
这的确是很难解释的现象，但如楼上所说，很多时候我们只能大量筛。
今天实验和楼主差不多，质粒里是我的条带，就是不知道为什么顺序变了。。。
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3楼2010-12-14 23:25:05
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用的质粒启动子是什么？taq启动子？
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4楼2010-12-15 09:07:37
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
tetA gene of plasmid RP4
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2010-12-15 09:07:37:
用的质粒启动子是什么？taq启动子？

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5楼2010-12-19 11:06:29
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gundamba at 2010-12-14 23:04:45:
我出过这样的问题！！！后来也在小木虫上问，没得到合理的解答，后来我大批量的筛，筛出来了，但是这种情况还是有！

我做个对照试验，就是把提好的质粒不任何处理，再次转入感受态细胞中，然后从转化子中提取质粒，突然发现质粒条带还有，但是质粒条带下方莫名其妙地多了一个条带，请问这怎么解释呢？是不是感受态细胞污染了呢？
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6楼2010-12-19 11:09:43
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gundamba

木虫 (小有名气)
★ ★
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silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-22 11:44:27
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-19 11:09:43:



我做个对照试验，就是把提好的质粒不任何处理，再次转入感受态细胞中，然后从转化子中提取质粒，突然发现质粒条带还有，但是质粒条带下方莫名其妙地多了一个条带，请问这怎么解释呢？是不是感受态细胞污染了 ...

这种情况我没有出现，建议楼主再做一次，40管一批的筛筛看。我那个情况不是因为感受态污染，有可能是质粒本身的问题吧
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7楼2010-12-20 19:37:56
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gundamba at 2010-12-20 19:37:56:

这种情况我没有出现，建议楼主再做一次，40管一批的筛筛看。我那个情况不是因为感受态污染，有可能是质粒本身的问题吧

请问“40管一批的筛筛”是什么意思呢？
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8楼2010-12-20 21:25:39
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gundamba

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-20 21:25:39:

请问“40管一批的筛筛”是什么意思呢？

我是这样，做完转化，挑40管单菌落进行验证...
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9楼2010-12-21 15:36:39
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gundamba at 2010-12-21 15:36:39:

我是这样，做完转化，挑40管单菌落进行验证...

好的，谢谢哦！
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10楼2010-12-21 21:36:31
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