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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒的不相容性
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wjswj

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒的不相容性

资料：
中文名称：质粒不相容性 英文名称：plasmid incompatibility 定义1：细菌质粒分类的一种标准，指在无选择压力的条件下，亲缘关系密切的不同质粒或同一不相容群的质粒不能稳定共存于同一宿主细胞，在细胞增殖过程中将有一种被排斥的现象。 所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；核酸与基因（二级学科） 定义2：同一类型质粒不能在同一细胞中并存的现象。

同种的或亲缘关系相近的两种质粒不能同时稳定地保持在一个细胞内的现象，称为质粒不相容性。当一种新的质粒进入已经含有质粒的细胞中时，若两种质粒同源或近缘，它们就会竞争资源，而竞争的结果就是一个胜利另一个则被消除。但此过程需要几代或几十代或更长的细菌繁殖周期，而并不是一个快速的过程。质粒被分为两大组，同组中的质粒会相互竞争排斥。 　　如果使带有同种的或亲缘关系相近质粒的细菌彼此杂交，质粒DNA的传递可受抑制，但这种称为表面排斥（surface exclusion），以便与不相容性相区别。不相容现象的机制尚未详细阐明，可能是在质粒DNA复制的某个阶段起相互排斥的作用。这种现象是质粒分类的主要指标。此外，整合到寄主染色体中的质粒和自主性质粒之间也具有不相容性，例如在大肠杆菌的Hfr菌株细胞中，自主性质粒F因子就不能稳定地保持。

我的试验现象：
    最近工作需要，要完成数百个质粒（质粒来源相同，插入片段不同，外源片段的引物也不同）的制备，也就是转化鉴定提取这个步骤。但算下来工作量不小，于是尝试一次转化中转化数十种质粒。问题来了，在随后的菌落PCR（多重扩增）鉴定过程中发现我挑取的一个单菌落作为模板扩增，总是能得到不止一种外源片段产物。开始以为可能是存在污染的情况，但阴性对照比较明显的否定了这个情况。

讨论：资料中提到的几代或几十代或更长的时间为多久？同源同种不同外源片段的质粒在同一宿主中能稳定多久？希望有相关经验的大侠来指教一下。TA克隆/建文库的时候就可以完成质粒不相容的过程，那多质粒的转化呢？需要多久可以完成这个过程？
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1楼 2011-03-23 10:30:06
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-03-23 19:26:21
wjswj(金币+5): 谢谢！ 2011-03-24 11:15:57
同源同种不同外源片段的质粒在同一宿主中可以没有任何竞争哦，同时存在和其中某个丢失，是完全随机的。
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2楼2011-03-23 14:00:01
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wjswj

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-23 14:00:01:
同源同种不同外源片段的质粒在同一宿主中可以没有任何竞争哦，同时存在和其中某个丢失，是完全随机的。

那构建文库的时候是不是也会出现这样的现象啊？
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3楼2011-03-24 11:15:40
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
不能使用通用的引物吗？比如载体上的引物？
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4楼2011-03-24 12:22:42
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susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2011-03-24 11:15:40:
那构建文库的时候是不是也会出现这样的现象啊？

不好意思，没有构建过文库。
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5楼2011-03-24 14:18:07
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wjswj

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-03-24 12:22:42:
不能使用通用的引物吗？比如载体上的引物？

不能的，每种片段都要严格的保守。即使通用引物也会出现这种情况啊
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6楼2011-03-25 10:13:59
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junjie2010

铜虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-03-29 08:44:12
wjswj(金币+5): 谢谢你的经验，我的目的是丢掉细菌中少的那些质粒，多的留下，不加抗生素会加速这个过程吧？ 2011-04-02 14:42:19
"资料中提到的几代或几十代或更长的时间为多久?",我在做发酵过程中明显发现当大肠杆菌传到100代以后就会出现明显的质粒丢失，在300代时这种现象会变的更加明显。我前段时间想把一个细胞内的质粒给丢失掉，只需要在43度条件下培养18个小时后，转接到0.015%SDS+LB培养基37度培养，18个小时后检测发现有70%的质粒已经丢失了。
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7楼2011-03-28 20:50:53
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chinosaur

木虫 (正式写手)
wjswj(金币+2): 相同的类型在短时间内也会共存，问题是怎样分开。 2011-04-02 14:43:56
其实相容不相容主要是看复制子就是ori的类型，如果一样就不相容，选不一样的ori的载体就不会不相容了
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8楼2011-03-28 22:08:41
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