24小时热门版块排行榜    

查看: 1558  |  回复: 8

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

[求助] PCR产物胶回收试剂盒 已有1人参与

最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,加A,用于下一步和T载体连接,
加A之后跑了下电泳,上样量5微,结果效果就成这么暗了,用的是上海捷瑞的胶回收试剂盒,
搞了11个片段,第三遍了~,前两次都回收不到,试剂盒换的是新的一套,结果还是这么惨,
求各位大神帮分析下,或者提供下自己用的比较好的试剂盒(最小片段2.6K,3个3.5K,剩余基本都是5K左右)


PCR产物胶回收试剂盒
PCR产物.jpg


PCR产物胶回收试剂盒-1
加A后回收.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-17 10:25:58
dllchina: 金币+2, 有帮助, 谢谢 2014-03-17 19:26:03
的确很低,浓度你再测一下,看看连载体是否达到要求。我们实验室用的试剂盒是天根产的效果还可以。
hehe
2楼2014-03-17 07:53:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,可以估量。
加A之后不用回收,直接估量就行,然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min,你看看温度你设置的对不对?
3楼2014-03-17 17:01:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 17:01:40
最近在克隆片段,5K左右,PCR上样20微,条带挺亮的了
回收后,可以估量。
加A之后不用回收,直接估量就行,然后连接。
加A用Taq酶是72度反应30min,你看看温度你设置的对不对?

是这个温度,酶还是用的新的
4楼2014-03-17 19:25:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 19:25:20
是这个温度,酶还是用的新的...

那你回收之后带亮不亮?   加A之后可以不回收,直接做转化。
5楼2014-03-17 20:12:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 20:12:31
那你回收之后带亮不亮?   加A之后可以不回收,直接做转化。...

回收之后不亮,就是图2那种暗暗的,所以想着换试剂盒
6楼2014-03-17 20:15:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 20:15:03
回收之后不亮,就是图2那种暗暗的,所以想着换试剂盒...

你回收的时候,胶要多溶一会,过柱子过3-4次,这样可以稍多一些。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2014-03-17 20:16:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-17 20:16:29
你回收的时候,胶要多溶一会,过柱子过3-4次,这样可以稍多一些。...

恩,下次应助回帖吧,我好给你金币,准备换个厂家的试剂盒,捷瑞的有点挫~
8楼2014-03-17 23:13:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dllchina at 2014-03-17 23:13:00
恩,下次应助回帖吧,我好给你金币,准备换个厂家的试剂盒,捷瑞的有点挫~...

好的。能对你有帮助就行。
9楼2014-03-18 10:39:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dllchina 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +5 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 6/300 2026-03-02 09:36 by 破风α
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见