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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物纯化与回收
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] PCR产物纯化与回收 已有8人参与

我查过我要做的内切酶活性受PCR反应体系影响比较大，现在打算做个纯化看看，不知道是把PCR产物直接用试剂盒纯化还是先电泳再切胶纯化，哪个回收效率高？（我的PCR产物电泳条带较亮，没杂带，二聚体较淡）
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1楼 2011-06-08 09:49:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★
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直接回收效率高。割胶回收收率肯定低些。
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仕不可不弘毅，任重而道远
3楼2011-06-08 10:23:11
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普通回帖

sfb1020

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
先电泳再切胶回收纯化。
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2楼2011-06-08 09:57:37
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shine372

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 同意 2011-06-08 16:12:47
割胶回收的会比较纯，而直接回收的还是会有杂
内切酶活性受PCR反应体系影响大的话，建议还是割胶回收吧
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4楼2011-06-08 10:29:49
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 言之有理 2011-06-08 16:12:57
西瓜(金币+3, EPI+1): 有道理。我们也是，没有砸带就用直接用试剂盒或者乙醇沉淀纯化，有杂带就胶回收。 2011-06-08 18:45:49
你的电泳条带比较亮无杂带的话就可以直接纯化，不过纯化的时候体积要小一些，浓缩一下。。。
如果有杂带的话最好切胶纯化。。。
其实主要还是为了下游实验服务的。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-06-08 10:42:16
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 我也支持楼上 2011-06-08 16:13:10
楼上说的很正确，关键看你有没有杂带，如果没有杂带，且片段大小超过500bp，可以用清洁试剂盒，如果有杂带的话，就必须胶回收。就回收效率而言，二者几乎没有任何分别，清洁试剂盒的优势就是少了跑胶的步骤。
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6楼2011-06-08 15:22:47
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
肯定是电泳后切胶回收的效果好了
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生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
7楼2011-06-08 16:20:21
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 有道理 2011-06-08 18:46:29
切胶回收比较纯，但是UV对其有影响，建议如果特异性比较好，并且条带>500bp就直接用pcr产物纯化就行
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
8楼2011-06-08 16:46:39
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-08 10:42:16:
你的电泳条带比较亮无杂带的话就可以直接纯化，不过纯化的时候体积要小一些，浓缩一下。。。
如果有杂带的话最好切胶纯化。。。
其实主要还是为了下游实验服务的。。。

我的PCR产物大小220多bp,无杂带，二聚体弱，这样的合适直接纯化么？（弱弱的说一句，我觉得每次切胶双手都要暴露在UV下，心里还是不舒服啊）
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9楼2011-06-08 17:11:01
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cdl007

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): good 2011-06-08 19:05:26
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-06-08 09:49:05:
我查过我要做的内切酶活性受PCR反应体系影响比较大，现在打算做个纯化看看，不知道是把PCR产物直接用试剂盒纯化还是先电泳再切胶纯化，哪个回收效率高？（我的PCR产物电泳条带较亮，没杂带，二聚体较淡）

大家回答问题的时候看清提问者困惑的地方。

他说查过，内切酶活性受PCR反应体系影响大，需要纯化，不是说条带杂需要纯化。


完全直接试剂盒纯化。

试剂盒直接纯化是去除PCR反应体系里的盐离子，taq酶，dNTP，引物等，主要是去除掉盐离子Mg或K，
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10楼2011-06-08 17:15:42
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